金開瑞專注于抗體定制多年，一站式的抗體服務、多樣性的宿主系統、規模化的生產、嚴格的質控標準，使得金開瑞的定制抗體穩定可靠，滿足客戶的應用需求，深受國內外客戶的歡迎。
一張漂亮的IHC圖是怎么誕生的？實驗過程中我們應該注意些什么呢？
話不多說，直接上干貨，現在小編就跟大家分享IHC 實驗中可能出現的各種問題及應對策略，希望給科研君的實驗帶來實實在在的幫助~
| 問題 | 原因 | 解決方案 |
| 邊緣效應 | 組織邊緣貼附不牢，邊緣組織松脫漂浮于液體中 | APES/多聚賴氨酸處理玻片；組織切片盡量?。槐M量避免選用壞死較多的組織 |
| 試劑未充分覆蓋組織 | 滴加試劑時讓試劑完全覆蓋組織 | |
| 非特異性染色 | 抗體質量問題 | 使用質量有保證的抗體 |
| 抗體孵育時間長 | 減少孵育時間 | |
| 抗體濃度過高 | 降低抗體濃度 | |
| 一抗為多抗 | 使用單克隆抗體 | |
| 內源性過氧化物酶及生物素 | 延長滅活時間 | |
| 封閉不足 | 延長封閉時間 | |
| DAB孵育時間過久或濃度過高 | 按說明書配置試劑，鏡下控制反應時間 | |
| 抗體孵育后洗滌不充分 | 每次孵育之后洗3*5次 | |
| 實驗過程干片 | 及時滴加試劑 | |
| 陰性結果 | 抗體濃度及質量 | 選擇有質量保證的抗體，先做預實驗摸索抗體使用濃度 |
| 抗原修復不足 | 摸索合適的抗原修復方式及修復時間 | |
| 封閉時間過長 | 減少封閉時間 | |
| DAB孵育時間短 | 鏡下控制顯色時間 | |
| 細胞通透不全，抗體未能進入細胞反應 | 選擇合適的通透劑及其反應時間 | |
| 一抗二抗不匹配 | 選擇正確來源的二抗 | |
| 脫片 | 玻片未處理好 | 玻片清洗干凈后用APES或多聚賴氨酸處理 |
| 切片厚薄不均勻 | 更換刀片；調整好切片機狀態 | |
| 烤片時間或溫度不夠 | 60℃ 2小時 | |
| 組織自身問題 | 腫瘤壞死組織及骨組織本身易脫片 | |
| 抗原修復時溫度迅速變化 | 抗原修復后讓其自然冷卻 | |
| 染色弱 | 抗體濃度低，孵育時間短 | 提高抗體濃度，延長反應時間 |
| 試劑使用超過有效期 | 試劑定時更新 | |
| 滴加試劑時殘余緩沖液過多使試劑稀釋 | 滴加試劑前盡量減少殘余液體 | |
| 封閉過度 | 減少封閉時間 | |
| 著色不均勻 | 切片厚度不一致 | 更換刀片；調整好切片機狀態 |
| 劑配制未混勻使局部濃度不一致 | 試劑充分混勻后滴加 | |
| 試劑未完全覆蓋組織 | 滴加試劑時讓試劑完全覆蓋組織 | |
| 脫蠟不完全 | 更換脫蠟劑或延長脫蠟時間 |