核酸質控作為分子生物學最基礎的實驗之一,核酸定量的準確與否直接決定著下游實驗的結果。目前市面上在用的核酸定量方法主要是紫外光吸收法和Qubit熒光染料法。
紫外光吸收法利用分光光度計測定260nm處的吸光度,對DNA和RNA進行定量。與此同時,還能通過計算OD260/OD280估計核酸的純度,但檢測數值極易受到其他污染物(如游離核苷酸、鹽和有機化合物)的影響。
Qubit熒光染料法利用熒光染料特異地與雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA或蛋白質相結合,并在特定波長光源的激發下,發出熒光,并不受樣本中可能存在的其他雜質分子影響,熒光強度與樣品中的靶分子濃度相對應。

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表6. 翌圣NGS定量產品選擇指南
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產品類別 |
產品名稱 |
貨號 |
定量范圍 |
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dsDNA HS |
dsDNA HS Assay Kit for Qubit® |
0.2-100 ng; 10 pg/µL-100 ng/µL |
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Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 雙鏈DNA(dsDNA)定量試劑 |
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1×dsDNA HS Assay Kit |
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dsDNA BR |
dsDNA BR Assay Kit |
2-1000 ng; 0.1 ng/µL-1000 ng/µL |
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ssDNA qubit |
ssDNA Assay Kit for Qubit® |
1–200ng; 50 pg/μL-200 ng/μL |
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qPCR法文庫定量 |
Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina, qPCR Master Mix |
12302ES |
定量預混液 |
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Hieff NGS® Library Dilution Buffer |
12303ES |
文庫稀釋液 |
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Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina, DNA Standard (1-6) |
12307ES |
定量標準品 |
