法。 該試劑盒僅需要兩個簡單的混合步驟而無需純化步驟。試劑盒中使用的
iFluor TM和 mFluor TM染料的琥珀酰亞胺酯（SE）顯示出與蛋白質的脂族
胺的良好反應性和選擇性，并形成羧酰胺鍵，其與天然肽鍵相同且穩定。
iFluor TM 和mFluor-抗體綴合物可用于免疫熒光染色，熒光原位雜交，流式
細胞術和其他生物學應用。 每個 ReadiLink?Rapid 抗體標記試劑盒都提供了
進行兩次偶聯反應（2x50μg 蛋白質）的所有必需成分。 每個試劑盒可用于
標記 50-100μg 單克隆，多克隆抗體或其他蛋白質（> 10 kDa），只需兩個
簡單的混合步驟
Readilink?快速試劑盒標記原理
1.通過在反應緩沖液（pH 7.5-8.5）中將標記染料與蛋白質（待標記的）混合，
開始標記反應。
2.孵育得到所需蛋白質綴合物和非反應性游離染料的混合物。
3.通過將非熒光 Tide Quencher
TM（TQ）染料與反應溶液混合來淬滅反應。 TQ 染料阻止反應并將非反應性自由
標記染料轉化為非熒光 TQ 標記染料復合物，這消除了游離標記染料的背景熒光干擾。
試劑盒組成
Components Amount Storage
Component A：Mitolite?Red 2 vial (one vial is for 50 ug protein) —20℃
Component B：Live Cell Staining Buffer 1 vial (20uL) —20℃
Component C：TQ?-Dyed Quench Buffer 1 vial (20uL) —20℃
標準操作規程（標記 50μg 蛋白質）
將所有組分加熱并在打開前將樣品瓶短暫離心，并在開始結合前立即準備所需的溶
液。 以下 SOP 是標記抗 HDAC IgG 抗體的實例。
1.準備蛋白質溶液（溶液 A）：
為了標記 50μg 蛋白質（假設目標蛋白質濃度為 1 mg / mL），將 5μL（總反應體
積的 10％）反應緩沖液（組分 B）與 50μL 目標蛋白質溶液混合。
注 1.如果蛋白質濃度不同，請相應調整蛋白質體積，使~50μg 蛋白質可用于標記
反應。
注 2：為了標記 100μg 蛋白質（假設目標蛋白質濃度為 1 mg / mL），將 10μL
（總反應體積的 10％）反應緩沖液（組分 B）與 100μL 目標蛋白質溶液混合。
注 3：蛋白質應溶解于 pH7.2-7.4 的 1X 磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）中;如果蛋白質溶解
在甘氨酸緩沖液中，必須用 1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，或使用 Amicon Ultra- 0.5，
Ultracel-10 膜，10 kDa（來自 Millipore 的 cat＃UFC501008）去除游離胺或銨
鹽（如硫酸銨和乙酸銨）。
注 4：用牛血清白蛋白（BSA）或明膠穩定的不純抗體或抗體不能很好地標記。
注 5：如果蛋白質濃度低于 1 mg / mL，結合效率會顯著降低。為獲得最佳標記效
率，建議最終蛋白質濃度范圍為 1-2 mg / mL。
2.運行結合反應：
2.1 將蛋白質溶液（溶液 A）加入一小瓶標記染料（組分 A）中，通過反復移液幾
次將其充分混合，或將小瓶渦旋幾秒鐘。
注意：使用標記染料的兩個小瓶（組分 A）通過將 100μg 蛋白質分成 2x50μg 蛋
白質并使每個 50μg 蛋白質與一小瓶標記染料反應來標記 100μg 蛋白質。 將兩個
小瓶合并用于下一步。
2.2 將綴合反應混合物在室溫下保持 30-60 分鐘。
注意：如果需要，可以旋轉或搖動綴合反應混合物更長的時間。
3.停止共軛反應：
3.1 加入 5uL（50μg 蛋白質）或 10μL（100μg 蛋白質），這是 TQ 染色猝滅緩沖
液（組分 C）總反應體積的 10％到共軛反應混合物中（來自步驟 2.2），混合。
3.2 在室溫下孵育 10 分鐘。
3.3 使用標記的蛋白質（抗體）。 蛋白質共軛物的儲存
蛋白質綴合物應在載體蛋白（例如 0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5mg / mL 儲
存。 為了更長時間的儲存，可以將蛋白質綴合物凍干或分成單次使用的等分試樣
并在≤-20℃下儲存。
名稱 貨號 規格 價格
ReadiLink? FITC 抗體標記試劑盒 1299 2 Labelings 1740
ReadiLink?RPE 抗體標記試劑盒 1310 2 Labelings 5940
ReadiLink?APC 抗體標記試劑盒 1311 2 Labelings 5940
ReadiLink?PerCP 抗體標記試劑盒 1312 2 Labelings 3540
ReadiLink? Cy7 抗體標記試劑盒 1294 2 Labelings 1740
ReadiLink? mFluor?620 抗體標記試劑盒 1123 2 Labelings 1740
ReadiLink? iFluor?488 抗體標記試劑盒 1255 2 Labelings 1740