馬上要做慢病毒相關實驗了，你是否會有這樣那樣的焦慮，不知從何下手?。?/span>
實驗室沒有做過慢病毒實驗，沒有師兄師姐帶，我需要了解些什么基礎知識？
我該怎么準備實驗，哪個公司的慢病毒產品靠譜啊？
找到靠譜的供應商，怎么找感染條件??？
找到感染條件選哪個時期的細胞?。?/span>
怎么看熒光??？
感染效率低，達不到預期結果？
實驗中出現各種無厘頭的問題，解決起來耗費精力且令人頭大，誰可以幫幫我嗎？
…………
慢病毒實驗中常見的小問題
關于慢病毒，你首先要了解哪些東西？
Q1 慢病毒活性滴度怎么標定最準？
絕對定量！絕對定量！絕對定量！“絕對定量”是醫療級病毒產品的公認滴度檢測方法，諾華、Juno，這些CarT大佬們都在用！
2. TU=transducing units，即每毫升中含有的具有生物活性的病毒顆粒數。其他的VG/mL，VP/mL指所有病毒顆粒數，有無生物活性均計算在內。
Q3 如何確認最佳感染條件？
使用不同助感試劑和不同的細胞數與病毒顆粒數比例進行感染預試驗，感染后選擇感染效率在80%左右，感染后細胞狀態正常且病毒使用量最小的感染條件作為最佳感染條件。
Q4 病毒感染時怎么選取的細胞？
在做病毒感染時除了使用合適的感染條件，更重要的是要使用處于對數生長期且細胞狀態正常的細胞，這樣才能保證細胞在病毒感染后仍能頑強生存。
Q5 對于細胞需要進行那些檢測？
細胞最好有STR分型鑒定并經過支原體污染檢測，如果在培養過程中以及發現支原體污染，可以使用支原體去除試劑盒消除細胞中的支原體。
Q6 不同的熒光基團要使用不同的發射波長，三種常見熒光的信息如下：
GFP 激發波長488 發射波長507
RFP激發波長563 發射波長582
mCherry激發波長587 發射波長610
Q7 病毒感染后qPCR檢測無過表達效果原因
第一：很可能是細胞目的基因內源表達水平太高，影響了外源的表達，建議選擇低表達細胞系；
第二：引物設計問題，過表達構建的都是CDS區，所以引物必須設計在CDS區才能檢測出外源的過表達
Q8 細胞感染效率是越高越好嗎？
細胞在感染完后感染效率達到80%即可進入下游實驗，不一定非到100%的感染效率才可進入下游哦
Q9 加入慢病毒后，細胞死亡很厲害，該如何處理？
細胞死亡很嚴重可能是由于慢病毒對該細胞有一定的毒性作用，需要調整并降低感染的 MOI 值，并且在感染后 4 小時、8 小時、12 小時對細胞進行觀察，若發現細胞狀態變差，則需要立刻對細胞進行換液操作，使用新鮮的完全培養液替換病毒感染培養液。
細胞培養過程中的常見問題：
1. 細胞用慢病毒一感就死或者出現小黑點：細胞老化或者病毒過感染了
2. 培養基快速變黃且渾濁：存在細菌污染
3. 細胞生長緩慢：病毒過感染或者支原體污染或者細胞老化
4. 高濃度病毒感染組出現細胞死亡，低濃度組正常：病毒濃度太高對細胞有傷害
5. 任何感染組細胞均死亡：目的基因功能蛋白對細胞生長有殺傷作用
6. 顯微鏡下就可看到縱橫交錯穿行的絲狀物：真菌污染
細胞實驗的污染問題是不是搞得人怕怕的？
別擔心，為了保證慢病毒的質量，吉凱的慢病毒開發出了的各級病毒純化工藝，以滿足科研、臨床前研究或臨床試驗的不同需求。
吉凱慢病毒的質檢包括支原體、內毒素、病毒毒性、真菌、細菌、活性滴度等多項指標，全方位保障病毒的高品質，免去您的后顧之憂。
吉凱結果和FDA要求匯總如下表
檢測項目 | 吉凱檢測結果 | 單位 | FDA參考范圍 |
支原體 | 陰性 | - - | 陰性 |
肉毒素 | < 50 | EU/ml | < 50 |
病毒毒性 | 無毒性 | - - | 無毒性 |
細菌 | 陰性 | - - | 陰性 |
真菌 | 陰性 | - - | 陰性 |
總DNA殘留 | 0.748-9.90 | ng/ul | 0.1-10.0 |
BSA殘留 | 7.99-29.82 | ug/ml | 0.1-30.0 |
活性滴度 | 1.0E+8-2.0E+9 | TU/ml | ≥ 1E+8 |
慢病毒的動物實驗不知道怎么注射動物，注射多少量？看看使用 吉凱慢病毒發表文章的小伙伴們是怎么做的吧。正式實驗前，可參考文獻中慢病毒注射的方式和劑量，設置梯度，確定注射參數。
不同于體外細胞實驗，病毒注射活體動物，必須具有高純度、高滴度及低毒性。尤其是腦部注射，僅允許1-5 μL的注射體積，為了達到理想的感染效果，注射的病毒滴度要求往往更高。此外，高純度病毒，因其含有極少的雜質，注射動物時不易引起炎癥反應。所以，各位小伙伴，病毒廠家多，選擇需謹慎哦！
吉凱的慢病毒產品，已助力客戶發表多項科研成果于Nature Medicine、Nature Immunology、Gastroenterology、Cell Metabolism、Nature Neuroscience等期刊上。
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【1】瑞金醫院高血壓研究所：A2A Receptor Activation Attenuates Hypertensive Cardiac Remodeling via Promoting Brown Adipose Tissue-Derived FGF21，Cell Metabolism（IF20.565）吉凱產品：干擾慢病毒
【2】北京安貞醫院：Cardiac Fibroblast-Specific Activating Transcription Factor 3 Protects Against Heart Failure by Suppressing MAP2K3-p38 Signaling，Circulation（IF 18.881）吉凱產品：干擾慢病毒、過表達腺病毒等
【3】山東大學附屬省立醫院：Blocking FSH inhibits hepatic cholesterol biosynthesis and reduces serum cholesterol，Cell Research（IF 15.393）吉凱產品：干擾慢病毒、過表達腺病毒等
【4】重慶醫科大學第二附屬醫院：CD36 palmitoylation disrupts free fatty acid metabolism and promotes tissue inflammation in non-alcoholic steatohepatitis，Journal of hepatology（IF 15.04）吉凱產品：慢病毒
【5】浙江大學醫學院附屬第二醫院：EphrinB2 Regulates Cardiac Fibrosis Through Modulating the Interaction of Stat3 and TGF-β/Smad3 Signaling，Circulation Research（IF 15.211）吉凱產品：干擾慢病毒
【6】中國科學院神經科學研究所：PDGFRβ cells rapidly relay inflammatory signal from the circulatory system to neurons via chemokine CCL2，Neuron（IF 14.319）吉凱產品：干擾慢病毒
【7】中山大學附屬第一醫院：Long noncoding RNA LERFS negatively regulates rheumatoid synovial aggression and proliferation ，The Journal of Clinical Investigation（IF 13.251）吉凱產品：過表達慢病毒
【8】首都醫科大學：Mandible exosomal ssc-mir-133b regulates tooth development in miniature swine via endogenous apoptosis，Bone research（IF 12.354）吉凱產品：上調和下調慢病毒。