金秋九月，又到了莘莘學子入學的時節，各種實驗課題得緊鑼密鼓安排上。作為一名經驗豐富的技術支持，每年都會遇到大量常見的問題，本月我們先盤點三期同學們困惑的問題：工具類載體那么多，我怎么選合適的做實驗呢？

常見的工具載體

市面上常見的，用于遞送外源基因實現上調或者下調的工具包含：質粒、慢病毒（LV）、腺病毒（AD）、腺相關病毒（AAV），選對了合適的工具，是獲得優質實驗結果的重要保障，我們先來看下三種工具病毒的異同點：

我們先看看幾種病毒的特點：

慢病毒：因潛伏期、致病期長而得名“慢”，基于HIV病毒來源的慢病毒，其包膜修改為水泡性口炎病毒的VSVG，以擁有針對眾多細胞感染能力的特性。其最大特點是感染細胞譜系廣，能夠整合，做出穩轉株，長期穩定表達；

腺病毒：因從腺體中分離而得名，為流感病毒特性，擁有針對大部分細胞高感染的特性，但病毒于細胞存在時間較短（細胞為一周，動物2~3周），適合短時間的高量表達。

腺相關病毒：其復制需要腺病毒的幫助而得名，特點是病毒顆粒極小，適合在動物致密的組織擴散，而且單位體積滴度很高，因此被廣泛用于動物實驗。但其表達基因的時間較長，且表達水平較低，動物實驗需要的周期也較長。

質粒：環狀質粒的特性類似腺病毒，都是DNA為遺傳物質，表達水平高，且快，但質粒的轉染細胞效率與腺病毒是天差地別的，僅對少部分腫瘤細胞或者工具細胞（293、Hela）有較好的遞送效果，一般用于做驗證類的實驗，如雙熒光素酶、CoIP等。

如何有效選擇工具載體

談了幾種工具的異同點，下面我們談談如何有效選擇工具載體：

考慮點：感染情況、基因大小、實驗周期。三者綜合考慮，如：

1.細胞實驗周期很長，那么只能考慮用慢病毒做為遞質，以穩轉株（穩定表達外源基因的細胞株）進行后續實驗。

2.若基因太大，超出病毒的包裝極限，那只能選擇質粒。但質粒遞送效率低怎么辦？那就使用電轉、納米材料等非常規手段遞送。

3.若質粒、慢病毒均無法有效遞送，可以試試腺病毒的感染效率（在不考慮慢病毒整合引發的細胞變化，一般細胞實驗優先推薦慢病毒，既能感染眾多細胞，又能滿足長期實驗，腺病毒在需要短時間高效表達的情況下，或者其他方式無法遞送的情況下才會選擇）。

4.質粒、腺病毒屬于游離的DNA特性，表達水平高且快；慢病毒由于基因組整合進入染色體，表達水平是要低于前者一個層級的，這點也要考慮在內，對于高表達需求的，盡量使用腺病毒。

考慮點：注射部位、基因大小、實驗周期、成本。

四者者綜合考慮，如:

1.三種病毒，從滴度上排序：AAV>AD>LV，滴度越高，等于單位體積內含有的病毒量越多，最終能感染的細胞數就越多，這就是AAV大量用于動物實驗的原因。一般注射分為兩種方式：

A.系統性注射，如尾靜脈、腹腔等，適合針對大型臟器或組織的遞送（心、肝、血管、肌肉），三種病毒均可，但慢病毒的成本相對較高，在均可選擇的情況下，盡量還是AAV。

B.原位注射，如腦立體、肝門靜脈等，這種方式大多需要對動物進行手術，缺點是實驗操作要求高，動物容易死亡，但非常節省病毒（約為系統性注射的五分之一），因此，幾種病毒都是可以的。

2.常規推薦的AAV，由于總包裝極限是4.7k（算上啟動子、終止子、標記基因），能分配給基因的容量也就0~3k（要看具體啟動子的大?。?。若要特異性表達，而恰好對應的特異性啟動子較大，超出包裝極限，那么AAV就做不了，只能更換LV或者AD。當然，如果也超出后來者的極限，那就得嘗試其他技術手段了。

3.慢病毒屬于整合型病毒，只要感染，不管細胞分裂與否，都能長期表達；AD不整合，在細胞存在一段時間（2~3周）則會丟失，如果用腺病毒，則需要在病毒注射之后的2周左右，再補注射病毒；AAV雖然也不整合，但其會伴隨染色體長期存在，適合在非分裂的細胞長期表達（>6個月），因此，實驗周期的確認對應選擇何種病毒。

4.表達時間上，AD（1~2天）>LV（3天）>AAV（3~4周），因此，想要快速表達的，就選擇前兩個。如造模之后只能維持一周，需要外源基因快速表達，那就只能舍棄AAV了。

以上就是小編盤點的常見工具病毒的特性以及使用注意事項。除上述提及的工具載體，吉凱基因還可提供更多優質基因操作工具，如懸浮細胞專用慢病毒、HSV病毒等，此外，還有大量的現貨病毒、對照病毒、AAV試用裝等，質優價廉，還在等什么，快來咨詢吧?。?！

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