一、百螢 羥芪巴脒*DNA和RNA染料*簡(jiǎn)介
?
羥芪巴脒（也稱為Fluoro Gold）用于染色DNA和RNA。與RNA相比，當(dāng)與DNA結(jié)合時(shí)，它表現(xiàn)出明顯不同的熒光發(fā)射譜。該陽(yáng)離子染料也經(jīng)常用作逆行神經(jīng)元示蹤劑。
圖1.羥芪巴脒*DNA和RNA染料*的化學(xué)結(jié)構(gòu)
?
二、百螢 羥芪巴脒*DNA和RNA染料*參數(shù)
?
Ex(nm) ???????358
Em(nm) ???????433
分子量 ???????472.54
溶 ??劑 ? ????Water
存儲(chǔ)條件 ????在-15℃以下保存，避光防潮
CAS ?????????223769-64-0
外觀 ????????黃色粉末
?
三、百螢 羥芪巴脒*DNA和RNA染料*實(shí)驗(yàn)方案
染色細(xì)胞示例
?
羥芪巴脒的使用與其他熒光示蹤劑基本相同。主要區(qū)別在于Fluoro-Gold在注射后存活時(shí)間，濃度范圍，組織和與其他組織化學(xué)技術(shù)的兼容性方面更靈活。 它比大多數(shù)其他熒光示蹤劑更耐褪色，更亮和熒光時(shí)間更長(zhǎng)。
1.染料濃度：建議使用1至10％羥基芪脒。初，建議濃度為4％。如果在注射部位發(fā)生壞死，或標(biāo)記太強(qiáng)，則將濃度降低至2％溶液。
2.染料管理：
2.1壓力注入 - 注射的體積范圍為0.05-1μl，通常為0.1-0.2μl。
2.2結(jié)晶 -可以從微量移液管的施用示蹤劑的晶體。
3.固定劑：可以使用任何固定劑或不使用固定劑，但常使用含有4％甲醛的PBS。含有高濃度重金屬（如鋨，汞）的固定劑會(huì)淬滅熒光，而高濃度（超過(guò)1％）的戊二醛可能會(huì)增加背景熒光。
4.組織化學(xué)處理：含有羥基芪脒的組織可以根據(jù)幾乎任何常見(jiàn)的組織學(xué)技術(shù)進(jìn)行處理。常使用固定組織的冷凍切片。
5.適用實(shí)驗(yàn)：可以進(jìn)一步處理切片用于第二標(biāo)記，例如放射自顯影，HRP組織化學(xué)，免疫細(xì)胞化學(xué)，第二熒光示蹤劑，熒光復(fù)染劑等。
6.固定、覆蓋：通常將切片安裝在涂有明膠的載玻片上，風(fēng)干，浸入二甲苯中，并用非熒光DPX塑料封固劑蓋上蓋玻片。切片可以用分級(jí)醇脫水，除非這與第二示蹤劑不相容。如果將羥基噻嗪與熒光免疫細(xì)胞化學(xué)組合，則將切片風(fēng)干并直接用DPX蓋上蓋玻片。
7.照相：使用寬帶紫外激發(fā)濾光片（激發(fā)?- ?323nm，發(fā)射 - 中性pH為620nm），用熒光顯微鏡觀察羥基芪脒。當(dāng)用中性pH緩沖液處理組織時(shí)發(fā)出金色，而當(dāng)用酸性（例如PH3.3）pH緩沖液處理組織時(shí)發(fā)出藍(lán)色。它可以用數(shù)碼或膠片拍攝（使用Ektachrome 200-400 ASA膠片進(jìn)行彩色打印，使用可比較的速度膠片進(jìn)行黑白打印）。大多數(shù)曝光時(shí)間范圍為10-60秒曝光，具體取決于物鏡放大倍數(shù)和標(biāo)記強(qiáng)度。三十（30）秒的暴露是平均的。可以利用多次暴露來(lái)同時(shí)顯現(xiàn)羥基噻嗪和另一種示蹤劑。因此，UV將與明場(chǎng)照明相結(jié)合，以在放射自顯影中同時(shí)定位具有HRP或銀顆粒的Fluoro-Gold。類似地，藍(lán)光激發(fā)可以組合以也可視化FITC的綠色發(fā)射顏色，而綠色激發(fā)光可以用于同時(shí)觀察碘化丙啶或溴化乙錠（熒光復(fù)染劑）的紅色發(fā)射顏色。
?
圖2.羥芪巴脒*DNA和RNA染料*實(shí)驗(yàn)光譜圖