血管的特性源于相互作用的復雜細胞群落，細胞類型的異質性對主動脈血管功能至關重要。單細胞測序可以探索血管的細胞特異性變化，為尋找治療相關疾病的潛在細胞靶點提供支持。好的懸液制備可以為后期單測數據提供有力的樣本支持，臨床上常見各種各樣的疾病血管類型，針對血管樣本吉凱也有特定的消化步驟，還可根據客戶的具體需要針對血管組織的特定類型細胞進行分選富集，一起來漲姿勢吧！
人血管組織單細胞懸液制備
1.?實驗目的
將人血管組織樣本分離，制備單細胞懸液，用于后續單細胞測序。
2.?實驗準備
樣本接收，拍照留存，超凈臺紫外消毒、備好冰盒冰板，準備好相應酶液。
【酶液】：
2mg/ml? ? ? ?collagenase I
1mg/ml? ? ? ? collagenase II
0.04 mg/ml ??DNase I
60 U/ml? ? ? ?hyaluronidase
HBSS
【清洗液】：
含0.5% BSA的 PBS
3.?實驗步驟
1.?按上述配方配制酶消化液，過濾；
2.?將樣本組織倒入培養皿中，放置在冰板上，記錄編號，拍照留存，加入清洗液，用清洗液清洗兩次；
3.?棄去清洗液后，向培養皿中加入少量消化液，用剪刀將樣本組織剪碎；
4.?組織剪碎后，用1ml消化液沖洗剪刀收集轉移到合適離心管中，加入適量酶液。????
5.?取20μl消化懸液進行臺盼藍染色鏡檢。
6.?用封口膜將離心管封好，將樣本放置在37oC搖床消化1h；
7.?消化30min時吹打消化液，觀察消化效果，發現組織基本消化
8.?消化完后，取20μl消化懸液進行臺盼藍染色鏡檢。
9.?將消化液通過100μm、40μm濾器轉移至50ml離心管內， 300×g 離心5min；
10.?棄去上層液體，加入1ml紅細胞裂解液輕柔吹散細胞，靜置3min，轉移至15ml管中；
11.?加入清洗液至10ml終止裂紅，300×g 離心5min；
12．棄去上清，加入清洗液重懸混勻，分別取20μl進行AO/PI計數及臺盼藍鏡檢，結果反饋。
部分實驗結果展示：
樣本：人動脈組織
分選后細胞活率：98.31%
活細胞濃度：9.98E+05/ml
結團率：7.02%
?
細胞活率：91.6%
活細胞濃度：3.28E+05/ml
結團率：10.9%
小鼠血管組織單細胞懸液制備
1.?實驗目的
將小鼠血管組織樣本分離，制備單細胞懸液，用于后續單細胞測序。
2.?實驗準備
樣本接收，拍照留存，超凈臺紫外消毒、備好冰盒冰板，準備好相應酶液。
【酶液】：
2U/ml? ? ? Liberase
2U /ml? ? ?Eletase
10μM? ? ? ?Y-27632
30 U/ml? ? hyaluronidase
HBSS
【清洗液】：
含0.5% BSA的 PBS
3.?實驗步驟
1．按上述配方配制酶消化液，過濾；
2．將樣本組織倒入培養皿中，放置在冰板上，記錄編號，拍照留存，加入清洗液，用清洗液清洗兩次；
3．棄去清洗液后，向培養皿中加入少量消化液，用剪刀將樣本組織剪碎；
4．組織剪碎后，用1ml消化液沖洗剪刀收集轉移到合適離心管中，加入適量酶液。????
5．取20μl消化懸液進行臺盼藍染色鏡檢。
6．用封口膜將離心管封好，將樣本放置在37oC搖床消化1h；
7．消化30min時吹打消化液，觀察消化效果，發現組織基本消化
8．消化完后，取20μl消化懸液進行臺盼藍染色鏡檢。
9．將消化液通過100μm、40μm濾器轉移至50ml離心管內， 300×g 離心5min；
10．棄去上層液體，加入1ml紅細胞裂解液輕柔吹散細胞，靜置3min，轉移至15ml管中；
11．加入清洗液至10ml終止裂紅，300×g 離心5min；
12．棄去上清，加入清洗液重懸混勻，分別取20μl進行AO/PI計數及臺盼藍鏡檢；結果反饋。
部分實驗結果展示：
樣本：小鼠肺動脈組織
細胞活率：93.2%
活細胞濃度：5.5E+05/ml
結團率：0%
樣本：小鼠頸動脈組織
細胞活率：95.28%
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