摘要
口腔鱗狀細胞癌（OSCC）放療抵抗是臨床治療難題，嚴重影響患者預后。本研究借助 X-RAD 320 輻照儀構建標準化輻射模型，揭示核心機制：S 期激酶相關蛋白 2（Skp2）在 OSCC 中高表達，通過激活 Akt/Wee1/CDK1 信號軸促進 Survivin Thr34 位點磷酸化，抑制 FBXL7 介導的 Survivin 泛素化降解，進而抑制輻射誘導的細胞凋亡，導致放療抵抗。靶向沉默 Skp2 或使用其抑制劑 SZL P1-41，可顯著提升 OSCC 細胞放射敏感性，尤其對放療抵抗細胞效果顯著。這一發現為 OSCC 放療增敏提供新靶點與策略，也彰顯了專業輻照儀在腫瘤放療機制研究中的核心支撐價值。
方法
選用 CAL27、SCC25 等 OSCC 細胞系及放療抵抗細胞系（CAL27-IR、SCC25-IR），構建 Skp2 敲低 / 過表達穩定細胞系及 Survivin 突變體模型。通過 X-RAD 320 輻照儀對細胞和裸鼠移植瘤進行電離輻射，模擬臨床放療場景。結合臨床組織樣本分析 Skp2 與 Survivin 的相關性；采用 Western blot、免疫沉淀驗證蛋白相互作用及修飾；借助 MTS、克隆形成實驗評估細胞增殖與放射敏感性；通過 caspase 3 活性檢測、Western blot 分析凋亡相關蛋白；利用免疫組化檢測組織中蛋白表達；通過裸鼠移植瘤實驗驗證體內放療增敏效果。
輻照儀的具體實驗方法
采用 X-RAD 320 輻照儀進行細胞和動物電離輻射處理。細胞照射時，將培養至對數期的 OSCC 細胞置于輻照儀指定位置確保均勻受照，設置 0-8 Gy 梯度劑量；動物照射時，對荷瘤裸鼠進行局部輻射，總劑量 10 Gy（2 Gy / 次，共 5 次），用鉛模保護正常組織。儀器自動調控照射參數保證劑量精準，照射后按預設時間點收集樣品或監測腫瘤生長，開展后續實驗。
輻照儀的重點實驗結果
輻照儀穩定輸出梯度劑量，成功構建 OSCC 放療抵抗模型，明確輻射可誘導 Skp2 介導的 Survivin 穩定，為機制驗證提供標準化工具；通過精準劑量控制，清晰區分 Skp2 敲低組與對照組的放射敏感性差異，Skp2 缺失后 OSCC 細胞在 2-8 Gy 劑量范圍內增殖抑制更顯著，凋亡率升高，直觀印證靶向增敏效果；借助臨床模擬分次照射模式，在裸鼠模型中成功驗證 Skp2 抑制劑聯合放療的協同抑瘤效果，為臨床轉化提供可靠數據支撐。
原文 Figure 2A：呈現不同劑量輻射下 Skp2 敲低組與對照組 CAL27 細胞的活力差異，直觀印證輻照儀誘導的劑量依賴性放射敏感性提升。
結果
Skp2 在 OSCC 組織和放療抵抗細胞中高表達，與 Survivin、磷酸化 Akt 呈正相關，且高表達 Skp2 的患者預后較差。沉默 Skp2 可顯著抑制 OSCC 細胞增殖、克隆形成能力，增強輻射誘導的凋亡，提升放射敏感性；過表達 Skp2 則可逆轉這一效應。Skp2 通過促進 Akt 泛素化激活 Akt/Wee1/CDK1 通路，增強 Survivin Thr34 磷酸化，抑制 FBXL7 介導的 Survivin K48 位泛素化降解；Survivin T34D 突變可模擬磷酸化狀態，抵抗輻射誘導的降解并削弱放射敏感性。Skp2 抑制劑 SZL P1-41 可降低放療抵抗細胞活力，促進凋亡，聯合放療在裸鼠模型中顯著縮小腫瘤體積，延長生存期。
原文 Figure 4B：通過免疫沉淀實驗展示 Skp2 缺失后 Survivin 的 K48 位泛素化水平，直接支撐 Skp2 抑制 Survivin 降解的核心機制；
原文 Figure 8A：對比 OSCC 親本細胞與放療抵抗細胞中 Skp2 和 Survivin 的表達差異，明確兩者與放療抵抗的關聯
結論
Skp2 通過激活 Akt/Wee1/CDK1 信號軸穩定 Survivin，抑制輻射誘導的 OSCC 細胞凋亡，介導放療抵抗。靶向 Skp2（沉默或抑制劑）可促進 Survivin 泛素化降解，恢復 OSCC 細胞放射敏感性，尤其對放療抵抗細胞效果顯著。X-RAD 320 輻照儀憑借精準的劑量調控、穩定的照射效果，為放療模型構建、敏感性量化及體內外療效驗證提供核心工具，助力明確 Skp2-Survivin 軸作為 OSCC 放療增敏靶點的潛力。該發現為克服 OSCC 放療抵抗提供新策略，也為腫瘤靶向放療研究提供新思路。
原文 Figure 9E：展示 Skp2 抑制劑聯合放療對裸鼠移植瘤體積的影響，印證聯合治療的體內協同抑瘤效果
①原文出處DOI：10.1038/s41420-025-02463-3