如何選擇合適的二抗
二抗是能和一抗結合的抗體，即抗體的抗體。主要用于檢測一抗的存在。一抗特異性結合抗原的，二抗是特異性結合一抗。即一抗的Fc段或Fab片段可以充當抗原刺激機體產生抗體。也就是說，一抗主要是IgG類免疫球蛋白，因此二抗就是抗IgG抗體。
一抗二抗都是一種可以特異結合別的物質的基團，而且一抗可以至少結合兩種其他基團（底物和二抗），如下圖是直標一抗。
一抗是特異性的結合目標蛋白，一抗需要發光物質或者顯色基團標記才能被檢測出來，否者一抗和蛋白的結合與否用肉眼是看不出來的。但是一抗往往比較特異每個都標記成本很高，通常會使用標記二抗可以和一抗結合，并帶有可以被檢測出的標記(如帶熒光、放射性、化學發光或顯色基團），所以如今的設計一般是二抗帶上可檢測標記，再來檢測一抗，而一抗識別底物。這樣，當一抗結合到底物上，就可以通過二抗檢測出來。
比如ECL 顯色原理：在 ECL 底物中，含有 H2O2 和魯米諾（及其衍生物），在 HRP（辣根過氧化物酶）的作用下，發出熒光。
二抗是由一抗種屬（比如兔，小鼠）的某一亞型的免疫球蛋白IgG免疫哺乳動物（一般是免疫山羊、馬、驢、騾和豚鼠及小鼠等動物）產生的抗體，因此二抗只結合特定的物種特定亞型的一抗。比如，羊抗小鼠（二抗）會特異性結合小鼠單抗（一抗）而不會結合兔多抗或大鼠單抗，所以二抗和一抗要匹配上。
實驗方法不同，二抗耦聯的基團就會不同，通常主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP)，熒光基團(FITC、 Rhodamine、PE、Dylight、Alexa Fluor 、cy3等)、生物素、金顆粒、。一般做WB、 ELISA、 IHC等實驗都是推薦HRP標記的二抗，IHC推薦生物書標記的二抗，做IF、 FC等都是熒光如Alexa Fluor 488、FITC、PE標記的抗體。
a.免疫印記（WB）
b.免疫組化（IHC/ICC）
c.免疫熒光（IHF/ICF)
d.免疫沉淀免疫共沉淀
特殊二抗
