鏈霉親和素純化介質(zhì)——一品多用，使用靈活，你get到了嗎？
鏈霉親和素(Streptavidin)是一種由同一亞基組成的四聚體蛋白。每個(gè)亞基與一個(gè)生物素分子結(jié)合，具有高度的親和力和特異性。蛋白或者抗體一旦生物素化，便可以結(jié)合在鏈霉親和素修飾的固相基底，如磁性材料或者是瓊脂糖上，進(jìn)行免疫共沉淀，結(jié)合在樹脂柱或者平板表面用作ELISA。
Streptavidin Agarose Resin 6FF將鏈霉親和素固定在高度交聯(lián)的6%瓊脂糖表面，主要用來(lái)純化亞氨基生物素或Strep標(biāo)記的蛋白、抗體、核酸等物質(zhì)，或者是固定生物素化蛋白后分離其他蛋白，如免疫沉淀。
表1 Streptavidin Agarose Resin 6FF親和介質(zhì)產(chǎn)品特性
|
參數(shù) |
指標(biāo) |
|
基質(zhì)（Matrix） |
高度交聯(lián)的6%瓊脂糖微球 |
|
配體（Ligand） |
鏈霉親和素 |
|
粒徑（Bead size） |
45-165 μm |
|
載量（Capacity） |
＞200 nmol Biotin/mL介質(zhì) |
|
最大壓力（PressureMax） |
0.3 MPa，3 bar |
|
pH穩(wěn)定范圍（pH range） |
2-10 |
1、直接快速分離任何生物素化分子，應(yīng)用廣泛，使用靈活。
2、專一性高，非特異性干擾少，結(jié)合穩(wěn)定。
3、純化樹脂材質(zhì)穩(wěn)定。
4、結(jié)合容量高。
5、Streptavidin Agarose Resin 6FF可特異性結(jié)合多種標(biāo)簽，如下表所示。
表2 鏈霉親和素可特異性結(jié)合的標(biāo)簽
|
名稱 |
結(jié)合能力 |
蛋白純化洗脫條件 |
推薦應(yīng)用 |
|
生物素 |
強(qiáng) |
強(qiáng)力變性緩沖液 |
固定生物素化抗體純化抗原，或固定生物素化蛋白來(lái)分離其他蛋白，如免疫沉淀 |
|
2-亞氨基生物素 |
較強(qiáng) |
酸性pH=4 |
純化帶此標(biāo)簽的蛋白，可重復(fù)使用。 |
|
可斷裂的生物素化試劑 |
強(qiáng) |
還原條件下 |
純化帶此標(biāo)簽的蛋白 |
|
Strep-tag II |
弱 |
用生物素競(jìng)爭(zhēng)洗脫 |
純化帶此標(biāo)簽的蛋白 |
|
Twin-Strep-tag |
較弱 |
用生物素競(jìng)爭(zhēng)洗脫 |
純化帶此標(biāo)簽的蛋白 |
1、平衡，使填料處于和樣品一樣的緩沖環(huán)境
2、上樣，通過(guò)重力將樣品上樣至色譜柱結(jié)合
3、洗雜，除去非特異性結(jié)合的雜蛋白
4、洗脫，將結(jié)合的目的蛋白從填料上洗脫
圖1 Streptavidin Agarose Resin 6FF純化亞氨基生物素標(biāo)簽蛋白結(jié)果電泳圖
圖2 Streptavidin Agarose Resin 6FF純化Twin-Strep-tag標(biāo)簽蛋白結(jié)果電泳圖
|
問(wèn)題 |
可能原因 |
推薦解決方案 |
|
柱子反壓過(guò)高 |
填料被堵塞 |
清洗樹脂。 |
|
裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上樣前最好用0.22 μm或0.45 μm濾膜過(guò)濾，或離心去除。 |
||
|
樣品太黏稠 |
樣品中含高濃度的核酸，延長(zhǎng)破碎時(shí)間直至粘度降低，或添加DNaseI （終濃度為5μg/ml），Mg2+(終濃度1mM)，冰上孵育10-15min |
|
|
緩沖液太黏稠 |
有機(jī)試劑或蛋白穩(wěn)定試劑（如甘油等）可能會(huì)引起反壓增高，降低操作流速。 |
|
|
洗脫組分中無(wú)目的蛋白 |
過(guò)度的裂解使目的蛋白變性 |
使用溫和的裂解條件，實(shí)驗(yàn)條件以經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。 |
|
目的蛋白聚集產(chǎn)生沉淀 |
在細(xì)胞裂解前溶液中加入DTT，終濃度為1-10 mM |
|
|
目的蛋白沒(méi)有完全洗脫下來(lái) |
洗脫體積太少 |
增加洗脫液體積，減小洗脫流速。 |
翌圣生物科技（上海）股份有限公司 商家主頁(yè)地 址： 上海市浦東新區(qū)天雄路166弄一號(hào)樓三層南單元 聯(lián)系人： 李自轉(zhuǎn) 電 話： 400-6111-883、021-34615995-8075 傳 真： 021-34615995-188 Email：lizizhuan@yeasen.com 相關(guān)咨詢國(guó)函批復(fù)！上海辰山國(guó)家植物園設(shè)立，國(guó)產(chǎn)試劑支撐植物多樣性科研攻關(guān) (2026-07-03T00:00 瀏覽數(shù):2316) 上新｜GMP級(jí)重組人GM-CSF，適配細(xì)胞治療、疫苗研發(fā)，全流程合規(guī)更省心 (2026-07-02T00:00 瀏覽數(shù):3396) 上新｜GMP級(jí)重組人IL-18，免疫細(xì)胞增效核心原料 (2026-07-02T00:00 瀏覽數(shù):3369) 100+ 種不同細(xì)胞全面驗(yàn)證— 翌圣生物轉(zhuǎn)染試劑：高效低毒的國(guó)產(chǎn)優(yōu)選 (2026-07-02T00:00 瀏覽數(shù):3392) 科研人集合啦！曬出你的qPCR高光時(shí)刻 (2026-07-02T00:00 瀏覽數(shù):3431) 重磅成果！翌圣生物聯(lián)合中檢院發(fā)表支原體檢測(cè)技術(shù)研究論文 (2026-06-30T00:00 瀏覽數(shù):4647) 聚焦單細(xì)胞與空間組學(xué)前沿，翌圣生物亮相第二屆西部單細(xì)胞與空間組學(xué)論壇 (2026-06-30T00:00 瀏覽數(shù):4749) 從機(jī)制到轉(zhuǎn)化：2026年5月高分文獻(xiàn)核心進(jìn)展與趨勢(shì)解讀 (2026-06-26T00:00 瀏覽數(shù):7605) Science 重磅成果：西湖大學(xué)團(tuán)隊(duì)攻克共價(jià)蛋白藥物核心瓶頸，建立通用高通量速效蛋白篩選平臺(tái) (2026-06-26T00:00 瀏覽數(shù):7408) 類器官·血管生成·侵襲·成瘤 | 基質(zhì)膠應(yīng)用案例合集 (2026-06-26T00:00 瀏覽數(shù):7533) ADVERTISEMENT
|