產(chǎn)品介紹
Hoechst 是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Hoechst常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)，也可以用于普通的細(xì)胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。
技術(shù)原理
DNA 結(jié)合：Hoechst能夠特異性地與雙鏈DNA結(jié)合，通過(guò)插入到DNA的小溝中，形成穩(wěn)定的復(fù)合物。這種結(jié)合方式使得染料的熒光特性發(fā)生改變，在特定波長(zhǎng)的激發(fā)光下發(fā)出藍(lán)色熒光。
熒光特性：Hoechst在紫外光或近紫外光激發(fā)下發(fā)出藍(lán)色熒光，其激發(fā)波長(zhǎng)通常在350 nm左右，發(fā)射波長(zhǎng)在460nm左右。這種藍(lán)色熒光具有較高的亮度和對(duì)比度，能夠清晰地顯示細(xì)胞核的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。
Hoechst 33258/ Hoechst 33342的區(qū)別
Hoechst 33258在活細(xì)胞中DNA的AT序列富集區(qū)域的小溝處與DNA結(jié)合，廣泛用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后可用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。兩者區(qū)別不大，但是Hoechst 33342對(duì)細(xì)胞的毒性作用更小一些，因此一般Hoechsts 33258用于細(xì)胞固定后再染色，而Hoechst 33342則可以對(duì)活細(xì)胞直接進(jìn)行染色。
使用方法
1. 用PBS或合適的緩沖液制備0.5 - 10 μg/mL Hoechst 33258染色液。
2. 細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33258染色液，約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1 mL染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100 μL染色液。
3. 在 37℃培養(yǎng)細(xì)胞10 - 20 min。
4. 用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。
5. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)350 nm，發(fā)射波長(zhǎng)460 nm。
結(jié)果展示
正常細(xì)胞的細(xì)胞核被Hoechst染色后，呈現(xiàn)出明亮的藍(lán)色熒光。細(xì)胞核的形態(tài)和結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn)。
常見(jiàn)問(wèn)題
Q：如何做到同時(shí)染色溶酶體和細(xì)胞核的？
A：建議用Hoechst 33258/ Hoechst 33342染色細(xì)胞核，這個(gè)染料可以直接染活細(xì)胞不需要固定操作。
Q：DAPI和Hoechst染料相當(dāng)類似，如何二選一？
A：DAPI是非常通用的藍(lán)色熒光染料，用于細(xì)胞核復(fù)染。對(duì)固定和透化的細(xì)胞/組織，具有非常明亮的細(xì)胞核標(biāo)記。然而，此染料被認(rèn)為是半滲透至不滲透的染料，用于活細(xì)胞染色的結(jié)合不一致。Hoechst 33342是一種細(xì)胞膜滲透性的染料，具有同DAPI的結(jié)合機(jī)制和熒光特征。非常適合用于活細(xì)胞成像，效果就如同DAPI用于固定細(xì)胞染色。
相關(guān)產(chǎn)品
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號(hào) |
規(guī)格 |
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40729ES10/76/80 |
10mg/500mg/1g |
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Hoechst 33258 Stain Solution (1mg/mL) |
40730ES03 |
1ml |
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40731ES10 |
10mg |
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Hoechst 33342 Stain Solution(1mg/ml) |
40732ES03 |
1 mL |