DTNB介紹及應用(DTNB Ellman’s Reagent)

產品描述：

DTNB為Ellman試劑。它用于比色法測定生物樣品中巰基。它易溶于水。在巰基化合物的存在下，無色的DTNB將被轉變成黃? 色的5-巰基-2-硝基苯甲酸。由于5-巰基-2-硝基苯甲酸在412 nm處具有最大吸收，DTNB的吸收光譜并不干擾巰基的測定。???

配置方法：

準確稱取0.198gDTNB用50mMNa2HPO4（pH＝7.0）配制成50ml溶液，存放于棕色瓶中，于暗處低溫保存備用。應該注意的是配置緩沖、濃度，儲存時要避免見光。??????

應用舉例：

???? ?半胱氨酸中自由巰基的定量檢測方法
?????? ?一、試劑的配制：

1、Tris－HCL緩沖液（0.25M）：DDW準確配制后，用鹽酸調節pH＝8.3；

2、半胱氨酸標準溶液（1mM）：準確稱取0.017563gL－半胱氨酸（175.63），用1ml甲酸溶解，以DDW定容至100ml；

3、DTNB（分子量：396.35）標準溶液（10mM）：準確稱取0.198175gDTNB用50mMNa2HPO4（pH＝7.0）配制成50ml溶液，存放于棕色瓶中，于暗處低溫保存備用：

4、DTNB分析溶液（0.1mM）：由1體積10mMDTNB標準液加99體積0.25M的Tris緩沖液配制而成，現用現配。

二、標準曲線的制作;

1、25℃條件下，用Tris緩沖液稀釋半胱氨酸標準液配成梯度的稀釋液（5.0ml），其濃度分別為：0.00mM、0.025mM、0.05mM、0.1mM、0.15mM、0.2mM；

2、取上述各濃度溶液1ml分別加入到5ml預先恒溫于25℃水中的DTNB分析溶液，搖勻，準確靜止10min，立即于波長412nm處測定吸光度值（A）。根據目的蛋白的吸光度在標準曲線上讀出對應的濃度即可

前塵公司提供的DTNB相關參數：

Product Name:DTNB

Product Number:D8130

Product Brand:Sigma

CAS Number:69-78-3

Molecular Formula:[-SC6H3(NO2)CO2H]2

Molecular Weight:396.35

APPEARANCE:YELLOW POWDER

SOLUBILITY:CLEAR YELLOW TO YELLOW-GREEN SOLUTION

AT 40MG PLUS 5ML OF ETHANOL

IR SPECTRUM:CONSISTENT WITH STRUCTURE

PURITY BY THIN LAYER CHROMATOGRAPHY:NLT 98%

SUITABILITY:SUITABLE FOR USE AS A REAGENT IN SULFHYDRYL

GROUP DETERMINATION

RECOMMENDED RETEST:5 YEARS

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