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DTNB介紹及應(yīng)用(DTNB Ellman’s Reagent)

產(chǎn)品描述：

DTNB為Ellman試劑。它用于比色法測(cè)定生物樣品中巰基。它易溶于水。在巰基化合物的存在下，無(wú)色的DTNB將被轉(zhuǎn)變成黃? 色的5-巰基-2-硝基苯甲酸。由于5-巰基-2-硝基苯甲酸在412 nm處具有最大吸收，DTNB的吸收光譜并不干擾巰基的測(cè)定。???

配置方法：

準(zhǔn)確稱(chēng)取0.198gDTNB用50mMNa2HPO4（pH＝7.0）配制成50ml溶液，存放于棕色瓶中，于暗處低溫保存?zhèn)溆谩?yīng)該注意的是配置緩沖、濃度，儲(chǔ)存時(shí)要避免見(jiàn)光。??????

應(yīng)用舉例：

???? ?半胱氨酸中自由巰基的定量檢測(cè)方法
?????? ?一、試劑的配制：

1、Tris－HCL緩沖液（0.25M）：DDW準(zhǔn)確配制后，用鹽酸調(diào)節(jié)pH＝8.3；

2、半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1mM）：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.017563gL－半胱氨酸（175.63），用1ml甲酸溶解，以DDW定容至100ml；

3、DTNB（分子量：396.35）標(biāo)準(zhǔn)溶液（10mM）：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.198175gDTNB用50mMNa2HPO4（pH＝7.0）配制成50ml溶液，存放于棕色瓶中，于暗處低溫保存?zhèn)溆茫?/SPAN>

4、DTNB分析溶液（0.1mM）：由1體積10mMDTNB標(biāo)準(zhǔn)液加99體積0.25M的Tris緩沖液配制而成，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作;

1、25℃條件下，用Tris緩沖液稀釋半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)液配成梯度的稀釋液（5.0ml），其濃度分別為：0.00mM、0.025mM、0.05mM、0.1mM、0.15mM、0.2mM；

2、取上述各濃度溶液1ml分別加入到5ml預(yù)先恒溫于25℃水中的DTNB分析溶液，搖勻，準(zhǔn)確靜止10min，立即于波長(zhǎng)412nm處測(cè)定吸光度值（A）。根據(jù)目的蛋白的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出對(duì)應(yīng)的濃度即可

前塵公司提供的DTNB相關(guān)參數(shù)：

Product Name:DTNB

Product Number:D8130

Product Brand:Sigma

CAS Number:69-78-3

Molecular Formula:[-SC6H3(NO2)CO2H]2

Molecular Weight:396.35

APPEARANCE:YELLOW POWDER

SOLUBILITY:CLEAR YELLOW TO YELLOW-GREEN SOLUTION

AT 40MG PLUS 5ML OF ETHANOL

IR SPECTRUM:CONSISTENT WITH STRUCTURE

PURITY BY THIN LAYER CHROMATOGRAPHY:NLT 98%

SUITABILITY:SUITABLE FOR USE AS A REAGENT IN SULFHYDRYL

GROUP DETERMINATION

RECOMMENDED RETEST:5 YEARS

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