為了讓糖尿病患者在治療時有更多的選擇，一些新型的治療糖尿病藥物在21世紀(jì)初應(yīng)運(yùn)而生，如胰高糖素樣肽-1(GLP-1)類似物。司美格魯肽(Semaglutide，又稱索馬魯肽)作為GLP-1類似物的代表藥物之一，在多個臨床試驗(yàn)研究已經(jīng)證明聯(lián)合不同的口服降糖藥可以有效控制血糖，并能夠使患者減輕體重、減少收縮壓及改善胰島β細(xì)胞功能，其三種劑型（降糖注射劑Ozempic、口服降糖藥Rybelsus和用于減重的注射劑Wegovy）在2023年銷售額超過了200億美元，因其在降糖減重領(lǐng)域的出色表現(xiàn)，業(yè)內(nèi)預(yù)計(jì)司美格魯肽在未來一段時間內(nèi)仍會保持強(qiáng)勁的銷售態(tài)勢，吸引不少企業(yè)爭相布局！
司美格魯肽的主鏈結(jié)構(gòu)為一個含有29個氨基酸的中間體多肽Arg34GLP-1(9-37)或含有27個氨基酸的中間體多肽Arg34GLP-1(11-37)，該中間體多肽生產(chǎn)制造主要有化學(xué)合成法、生物制備法，相對于化學(xué)合成法，生物制備法突破了產(chǎn)能瓶頸，更適合大規(guī)模連續(xù)生產(chǎn)，可進(jìn)一步降低生產(chǎn)成本，帶來更加明顯的經(jīng)濟(jì)效益增長。
表1. 司美格魯肽中間體多肽生物制備法舉例
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生物制備法（舉例1） |
生物制備法（舉例1） |
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基因合成 |
合成融合蛋白序列，包括一段融合肽、 腸激酶酶切位點(diǎn)和目的主分子序列 |
合成帶有GLP-1(9-37)基因序列 且為串聯(lián)表達(dá)序列 |
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工程菌構(gòu)建 |
導(dǎo)入到大腸桿菌中，構(gòu)建重組工程菌 |
導(dǎo)入到大腸桿菌中，構(gòu)建重組工程菌 |
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融合蛋白表達(dá) |
通過優(yōu)化融合肽序列，改變蛋白等電點(diǎn)及 親水性等性質(zhì)，有效提高了融合蛋白的表達(dá)量 |
高密度發(fā)酵誘導(dǎo)后獲得表達(dá)GLP-1(9- 37)的串聯(lián)表達(dá)包涵體蛋白，復(fù)性得到可溶蛋白 |
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中間體多肽獲得 |
融合蛋白經(jīng)過腸激酶酶切、純化等步驟后可得到 司美格魯肽中間體多肽Arg34GLP-1(9-37) |
可溶蛋白經(jīng)過Kex2酶以及羧肽酶B兩步酶切、 純化等步驟后即可獲得司美格魯肽中間體多肽GLP-1(9-37) |
腸激酶或Kex2酶搭配羧肽酶B作為司美格魯肽主肽鏈（生物制備法）關(guān)鍵酶切原料，酶切效果和價格成本對生產(chǎn)至關(guān)重要。翌圣生物致力為廣大藥企提供穩(wěn)定的酶原料，在司美格魯肽生產(chǎn)中可以提供高質(zhì)量的酶、完善的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品來幫助客戶提高產(chǎn)能及批次穩(wěn)定性、降低成本、快速切入市場。
翌圣生物針對司美格魯肽整體解決方案
01
重組腸激酶
重組腸激酶（rEK）是高純度的牛腸激酶輕鏈亞基，它有著和天然提取的腸激酶同樣特異的切割酶活性，切割位點(diǎn)Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標(biāo)簽，是N末端融合通常選擇的蛋白酶,在其他殘基的不規(guī)則切割發(fā)生水平較低。
翌圣目前可提供不同來源、不同級別、是否帶His標(biāo)簽的重組腸激酶，供客戶選擇。
表2.翌圣重組腸激酶系列產(chǎn)品選購指南
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產(chǎn)品貨號 |
20395ES |
20396ES |
20401ES |
20400ES |
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中文名稱 |
酵母表達(dá)重組腸激酶 (His標(biāo)簽) |
酵母表達(dá)重組腸激酶 (His標(biāo)簽)-GMP級 |
大腸桿菌表達(dá)重組腸激酶(不帶標(biāo)簽) |
大腸桿菌表達(dá)重組腸激酶 (不帶標(biāo)簽)-GMP級 |
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產(chǎn)品級別 |
R&D級別 |
GMP級別 |
R&D級別 |
GMP級別 |
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來源 |
畢赤酵母重組表達(dá) |
畢赤酵母重組表達(dá) |
大腸桿菌重組表達(dá) |
大腸桿菌重組表達(dá) |
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活性 |
5 U/uL |
5 U/uL |
≥5 U/uL |
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標(biāo)簽 |
His標(biāo)簽 |
His標(biāo)簽 |
不帶標(biāo)簽 |
不帶標(biāo)簽 |
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酶去除 |
可通過Ni2+親和柱輕松去除 |
可用陰離子交換樹脂（如DEAE-FF）純化去除 |
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活性定義 |
一個活性單位定義為25℃條件下，酶切12-16 h，在25 mM Tris-HCl，pH 8.0緩沖體系下，將500 μg帶有腸激酶酶切位點(diǎn)的融合蛋白切開95%所需要的酶量。 |
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// 產(chǎn)品特點(diǎn)
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特異性強(qiáng)：特定的蛋白酶，切割前面含有四個天冬氨酸的賴氨酸羧基端位點(diǎn)：Asp-Asp-Asp-Asp-Lys；
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純度高：不含其他蛋白酶，無非特異性切割；
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無動物源性：重組生產(chǎn)，無外源性的病毒污染，生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料；
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質(zhì)量穩(wěn)定：批量生產(chǎn)，可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產(chǎn)；產(chǎn)品批次間無差異，質(zhì)量穩(wěn)定；
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產(chǎn)能充足：500L 發(fā)酵罐可獲得~50 MU腸激酶，翌圣擁有5L-1500L不同體系發(fā)酵罐，滿足不同客戶不同階段對于產(chǎn)品批量要求；
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不同等級產(chǎn)品供應(yīng)：R&D級別（20395ES、20401ES）、GMP級別（20396ES、20400ES），GMP級別產(chǎn)品符合ISO 13485質(zhì)量管理體系。
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// 測試數(shù)據(jù)
腸激酶酶活測試：
圖1. 翌圣腸激酶（20395ES）與競品N的酶切效果一致
備注：陽性底物（20391ES）是一種通過DDDDK（腸激酶識別切割位點(diǎn)）連接兩段特定蛋白序列所構(gòu)成的融合蛋白，其整體分子量約為64.6 kDa，能夠被腸激酶特異性切割成兩個獨(dú)立的蛋白片段，其分子量分別約為27.9 kDa和36.6 kDa。本品作為腸激酶底物，可以用于重組或天然腸激酶的半定量或定性酶活性檢測。
腸激酶純度測試：
圖2. 翌圣腸激酶（20395ES）純度大于95%
備注：腸激酶理論值22.7 kDa，由于畢赤酵母表達(dá)后糖基化的影響，SDS-PAGE顯示目的蛋白的分子量約40 kDa。一般糖基化修飾后的條帶跑膠會存在向上稍微彌散帶（如右圖），我司也可提供去糖基化酶Endo H（Cat#20414)給客戶，供客戶去糖基化后跑膠測純度（如左圖）。
腸激酶酶切特異性測試：
圖3. 翌圣腸激酶（20395ES）非特異性切割比進(jìn)口競品N少
備注：在相同條件下，分別用翌圣腸激酶（20395ES）與進(jìn)口競品N的腸激酶進(jìn)行酶切測試。結(jié)果表明：純化后，翌圣腸激酶（20395ES）產(chǎn)生的非特異性切割雜質(zhì)明顯低于進(jìn)口競品N。
02
重組Kex2酶、羧肽酶B
表3 翌圣重組Kex2酶、羧肽酶B產(chǎn)品選購指南
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產(chǎn)品貨號 |
20418ES |
20417ES |
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中文名稱 |
Recombinant Kex2 Protease, Expressed in Yeast 酵母表達(dá)重組雙堿性內(nèi)切酶 |
Recombinant CPB, Expressed in E.coli 大腸桿菌表達(dá)重組羧肽酶B |
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產(chǎn)品級別 |
GMP級別 |
GMP級別 |
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來源 |
畢赤酵母重組表達(dá) |
大腸桿菌重組表達(dá) |
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活性 |
≥10.0 units/mg pro |
≥170 USP units/mg pro |
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切割位點(diǎn) |
特異性識別和切割A(yù)rg-Arg、Lys-Arg等雙堿性氨基酸羧基端肽鍵 |
專一水解蛋白質(zhì)C-末端堿性氨基酸（賴氨酸、精氨酸、組氨酸）的氨基端 |
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產(chǎn)品應(yīng)用 |
1.多肽藥物生產(chǎn)中的工藝酶切。 2.蛋白質(zhì)的酶解和肽圖分析、測序等。 |
1. 重組胰島素及其類似物的生產(chǎn)。 2. 蛋白質(zhì)C-末端氨基酸的測定。 3. 蛋白質(zhì)C-末端組氨酸標(biāo)簽的去除。 4. 其他重組多肽類物質(zhì)的生產(chǎn)。 5. 某些特殊化合物的酶促合成。 |
Kex2酶搭配羧肽酶B：串聯(lián)表達(dá)工藝需求，酶切后的司美格魯肽中間體產(chǎn)量高
翌圣GMP級別酶生產(chǎn)基地
ISO認(rèn)證超潔凈分子酶生產(chǎn)基地-UCF.ME，基地配備工業(yè)級AKTA純化與理化分析設(shè)備、百升級高密度發(fā)酵機(jī)組、萬級標(biāo)準(zhǔn)潔凈車間和自動化生產(chǎn)線。擁有 5L、10L、30L、100L、500L 和 1,500L 等不同規(guī)格的發(fā)酵純化系統(tǒng)，在分子酶產(chǎn)業(yè)化領(lǐng)域具備從 5L 到 1,500L 的逐級放大生產(chǎn)能力，可充分滿足下游客戶在研發(fā)、中試與大規(guī)模生產(chǎn)等不同階段的核心酶原料需求。
翌圣擁有強(qiáng)大的研發(fā)團(tuán)隊(duì)和先進(jìn)的酶生產(chǎn)基地，通過不斷的技術(shù)創(chuàng)新和優(yōu)化，持續(xù)提高司美格魯肽生產(chǎn)關(guān)鍵用酶（重組腸激酶）的質(zhì)量和產(chǎn)能，提供不同規(guī)格的梯度報(bào)價，滿足客戶的不同生產(chǎn)階段的各種需求。
Hot首推促銷產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
目錄價/元 |
促銷價/元 |
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Recombinant Enterokinase, His, Expressed in Yeast 酵母表達(dá)重組腸激酶(His標(biāo)簽) |
20395ES60/76/90/92/94 |
100 U/500 U/ 5000 U/ 100 KU/ 1 MU(1000 KU) |
425/1245/ 6745/ 39000/ 190000 |
408/1188/ 3888/ 19800/ 98000 |
相關(guān)產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
目錄價/元 |
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20401ES60/76/90 |
100 U/500 U /5000 U |
425/1245/6745 |
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20391ES03/11 |
1 mg/4 mg |
395/795 |
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Recombinant Kex2 Protease, Expressed in Yeast 酵母表達(dá)重組雙堿性內(nèi)切酶 |
20418ES60 |
100 μg |
1945 |
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20417ES03/10 |
1 mg/10 mg |
735/2285 |
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20414ES92/97 |
10000 U/ 50000 U |
585/2195 |