細胞結團的原因及解決辦法-低分子量葡聚糖硫酸鈉(DSS)

細胞培養過程中，有時會出現細胞結團，此時的細胞大多是輪廓模糊、透光性差，甚至會出現合胞體，伴有細胞碎片，這證明細胞已經衰老或產生病變，狀態不佳。

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1. 過度消化，某些用于組織分解的酶，如胰蛋白酶，如果過量使用會導致細胞結塊；

2. 環境壓力，物理壓力和反復的溫度變化會導致細胞死亡，從而導致細胞的“粘性”的DNA分子將相鄰的細胞連接在一起；

3. 組織分解，在制備單細胞懸浮液時，使用酶、機械或化學分解策略可使細胞破裂，從而導致碎片的聚團；

4. 過度生長，當細胞在其培養基中密度過大的時候，細胞將開始溶解并釋放碎片，碎片中的粘性因子會將細胞聚集到一起；

5. 污染，某些細菌和真菌病原體導致細胞溶解，結塊通常是細胞培養物被污染的跡象。

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1. 低密度傳代。將已聚集的細胞進行消化傳代，連續傳三次，細胞抱團就會越來越小，這樣幾代過后，再按照常規消化方法和時間能將細胞逐漸傳成單個細胞；

2. 選擇適當的離心轉速和時間離心聚團細胞。通常情況下，較快的速度可以離心散細胞，但在高速下也必須考慮細胞的脆弱性，所以適當的延長離心的時間也不失為一種較好的將懸浮聚團細胞離心散開的方法，但轉速及時間要通過實驗來把握。

3. 添加DNA酶I的內切酶。可以混合到培養基中，從破裂的細胞中分離DNA，分解這些多余的碎片有助于保持靶細胞生長的空間。但是，dna酶I使用過多會導致細胞突變，最終會影響實驗效果，所以不到萬一，不建議使用。

4. 添加低分子量葡聚糖硫酸鈉鹽?？梢曰旌系脚囵B基中，通過改變細胞表面電荷，促使單個細胞懸浮，防止結團，安全有效。例如CHO細胞，推薦濃度10~50mg/L以達到防止結團的效果。

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葡聚糖硫酸鈉（Dextran sulfate sodium salt，DSS）是葡聚糖的聚陰離子衍生物，由葡聚糖和氯磺酸的酯化反應形成，以鈉鹽形式提供，并通過添加少量磷酸鹽進行穩定。

Dextran sulfate sodium salt,Mw 5,000 葡聚糖硫酸鈉，平均分子量約5 kD，可通過改變細胞表面的電荷，來促使單個細胞懸浮，防止細胞結團，支持細胞高密度培養，提高細胞活力。

圖1.硫酸葡聚糖鈉鹽結構式

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1、 性能優良：純度高（98%），含硫量16~20%；

2、 穩定性高：聚陰離子復合物，可溶于水，形成無色溶液，形似天然粘多糖；

3、 安全無毒：可被自然降解，對細胞傷害較小。

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1、 支持高密度培養，阻止細胞結團，提高細胞活力；

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