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基本信息

主題：NMT發(fā)現(xiàn)神經元線粒體耗O₂速率增加為Bcl2家族改善神經元代謝提供直接證據

期刊：Nature cell biology

影響因子：20.042

研究使用平臺：NMT神經研究創(chuàng)新平臺

標題：Bcl-x_L?regulates metabolic efficiency of neurons through interaction with the mitochondrial F₁F₀?ATP synthase

作者：耶魯大學Elizabeth A. Jonas、Kambiz N. Alavian

檢測離子/分子指標

O₂

檢測樣品

大鼠海馬神經元

中文摘要（谷歌機翻）

離子/分子流實驗處理

① GFP-Bcl-x_L表達神經元與mito-GFP表達神經元CSCW2-熒光素酶慢病毒轉染7 d

② 單個不表達神經元或表達Bcl-x_L?shRNA或混亂shRNA的神經元CSCW2-熒光素酶慢病毒轉染7 d

③ 單個神經元10 μM ABT-737處理18 h

④ 90 mM KCl和5 mg ml^-1寡霉素處理表達Bcl-x_L-GFP或mito-GFP的單個神經元

⑤ 螢火蟲熒光素酶在有無1 μM ABT-737處理海馬神經元中的發(fā)光5 min，隨后用90 mM KCl處理90 s。

先前的工作描述了過表達Bcl-x_L的神經元中線粒體生物量的增加。如果線粒體生物量的增加是造成ATP水平升高的唯一原因，那么表達Bcl-x_L的細胞有望增加攝氧量。為了驗證這一點，使用O₂流速微傳感器檢測單個神經元的氧攝取量。與預期相反，過表達Bcl-x_L的神經元的O₂流速低于轉染mito-GFP的神經元（圖1b），這表明過表達Bcl-x_L的神經元更有效地將ATP的產生與O₂的吸收結合。內源性Bcl-x_L具有類似的作用，因為shRNA介導的消耗（圖1c, d）或Bcl-x_L活性的藥理抑制作用（圖1e）增加了神經元的O₂流速。這些數(shù)據表明，Bcl-x_L的消耗或抑制使ATP的產生與O₂的攝取解偶聯(lián)。

從理論上講，較高的ATP水平和過表達Bcl-x_L的神經元的O₂攝取水平較低，可能是由于電活動和突觸活動水平降低而導致ATP積累的靜止狀態(tài)。這不太可能，是因為Bcl-x_L過表達的神經元具有比對照更大的突觸和更多的自發(fā)活動。

因此，作者研究了過表達Bcl-x_L的神經元是否具有更大但未被充分利用的能量。當細胞在高鉀條件下去極化時，Bcl-x_L過表達的神經元O₂流速比基礎水平增加了約90%，這是一種已知的刺激神經元電活動和突觸活動的處理方法（圖1f），而mito-GFP表達對照則僅增加了50%。

在氧化磷酸化過程中，從線粒體基質中泵出的質子通過ATP合成酶處的線粒體內膜的H⁺流速（生產流速）和H⁺外排（非生產性）重新進入基質。減少非生產性外排可提高ATP生產效率。為了確定Bcl-x_L過表達的神經元在最大活性期間是否有不同程度的非生產性穿過內膜的外排，高鉀被迅速沖洗出去，并在寡霉素中測量O₂攝取量，寡霉素抑制與ATP生成相關的H⁺流速，但不抑制與非生產性外排相關的H⁺流速。與mito-GFP表達對照相比，GFP-Bcl-x_L細胞具有更高的產O₂流速與總O₂流速的比值，表明它們利用更高的整體峰值O₂流速百分比來制造ATP（圖1g）。

圖1. Bcl-x_L改變神經元對O₂的吸收

其他實驗結果

• Bcl-x_L過表達的神經元ATP水平升高，Bcl-x_L缺失的神經元ATP水平降低。

• Bcl-x_L是刺激引起的代謝變化所必需的。

• Bcl-x_L定位于線粒體內膜。

• 重組Bcl-x_L蛋白增強了F₁F₀?ATPase的酶促速率。
• 在F₁F₀?ATPase活動期間，Bcl-x_L抑制減弱H⁺進入亞線粒體囊泡。

• 內源性Bcl-x_L是ATP結合后抑制膜泄漏所必需的。

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