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Western Blotting 常見問題解答

作者：深圳市豪地華拓生物科技有限公司 2014-04-11T12:30 (訪問量:6929)

華拓專注于生產分銷品牌抗體、蛋白、多肽十一年，價格優惠，質量穩定，并提供完善的技術支持和售后服務。

Western Blotting 常見問題解答

1、膠片上存在反轉印象？膜上有黃色或棕色的沉積？在暗室中條帶過于明亮？條帶的發光
時間持續了至少8 小時？
可能原因：HRP 的濃度過高；
解決辦法：稀釋HRP 至少10 倍。
?
2、信號太弱或沒有？
可能原因：
1.太多的HRP 積聚導致信號快速的消退；
2.抗原或抗體的濃度不夠；
3.轉印不成功；
4.HRP 或其他底物的效價降低。
解決辦法：
1.稀釋HRP 至少10 倍；
2.增加其濃度；
3.尋找合適的轉移方法和條件；
4.選擇其他的合適底物。
3、背景高？
可能原因：
1.HRP 濃度過高；
2.封閉無效；
3.不適合的封閉試劑；
4.洗滌不充分和洗滌液的量；
5.膠片曝光過度；
6.抗原或抗體的濃度太高。
解決辦法：
1.稀釋HRP 至少10 倍；
2.尋找合適的封閉方法；
3.選用其他的封閉試劑；
4.增加洗滌的時間,次數；
5.減少曝光時間；
6.稀釋抗原或抗體。

4、蛋白質條帶上有空泡影像？
可能原因：
1.蛋白質沒有被充分轉?。?/div>
2.膜沒有預先浸濕；
3.在膠片和膜之間有氣泡。
解決辦法：
1.尋找合適的轉移方法和條件；
2.在轉印前充分浸濕；
3.在暴光之前趕走氣泡。
?
5、膠片上背景彌散？
可能原因：HRP 標記的抗體出現了積聚；
解決辦法：稀釋HRP 至少10 倍。

6、無特異性條帶？
可能原因：
1.HRP 濃度過高；
2.SDS 促使非特異蛋白質條帶黏附在目的蛋白質條帶上。
解決辦法：
1.稀釋HRP 至少10 倍；
2.在操作過程中不要加SDS。
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