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新品上市 │ 等溫擴增新寵——RPA技術核心酶原料重磅上市!

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2023-03-15T15:24 (訪問量:6555)

新品上市 │ 等溫擴增新寵——RPA技術核心酶原料重磅上市!

重組酶聚合酶擴增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)是Piepenburg等人在2006年利用參與細胞DNA合成的蛋白重組和修復開發出的一種新的核酸恒溫擴增技術。該技術可以在37~42 ℃條件下實現待測靶標的快速檢測。它具有反應靈敏度高、特異性強、對儀器依賴程度低且可整合多種檢測模式等優點,特別適用于基層和現場即時檢測,可廣泛應用于體外診斷、獸醫、食品安全、生物安全、農業等領域[1]。

RPA技術原理

RPA技術主要依賴于能結合寡核苷酸引物的T4噬菌體來源的重組酶T4 UvsX、單鏈結合蛋白gp32和鏈置換Bsu DNA 聚合酶以及兩條特異性的上下游引物實現擴增,具體擴增原理如圖1所示:

  1. 重組酶引物復合體的形成:重組酶T4 UvsX在ATP的參與和定位因子(T4 UvsY)的幫助下與擴增引物結合形成重組酶引物復合體,并在雙鏈DNA中尋找同源序列;

  2. 重組酶引物復合體定位至同源序列:重組酶引物復合體一旦定位到同源序列,則會插入雙鏈DNA形成D-環結構,啟動鏈置換反應,單鏈結合蛋白gp32會與解開的DNA鏈結合防止進一步被置換。

  3. 鏈置換擴增啟動:重組酶T4 UvsX從重組酶引物復合體中被水解,3'端引物暴露并與Bsu DNA聚合酶結合,DNA開始復制延伸,最終兩條母鏈分離,形成兩條新的互補雙鏈DNA。該反應在37-42℃下進行,可在30 min內實現目標序列1012倍的擴增。

圖1.重組酶聚合酶擴增RPA技術擴增原理圖[2]

RPA技術優勢

  • 快速檢測:10~30 min內(通常)將核酸樣本擴增至可檢測的水平。

  • 檢測靈敏度高:可將痕量的核酸模板(低至單拷貝)擴增至可以檢出的水平,且通常無需進行核酸純化。

  • 無需昂貴的配套儀器設備:37~42°C恒溫反應,無須熱循環,擺脫儀器束縛,方便快捷。

RPA技術應用

RPA技術可用于不同種類的目標生物檢測,如細菌、真菌、病毒、原生動物等的雙鏈DNA、單鏈DNA、甲基化DNA以及通過RNA或miRNA反轉錄產生的cDNA等核酸樣本。RPA目前有很多的應用,覆蓋了農業、醫學、食品、疫病防控等領域。

翌圣重組酶聚合酶擴增RPA技術核心酶原料

針對RPA技術,翌圣可提供自主研發的高品質核心酶原料,具備純度高、殘留控制嚴格、單次產能高可確保批間穩定性的產品優勢,主要包括鏈置換Bsu DNA polymerase、T4 UvsX Recombinase、T4 UvsY protein、T4 gene 32 protein及肌酸激酶Creatine Kinase。

01

產品與選擇

貨號

主要功能

產品名稱

11078ES

具有鏈置換活性的DNA恒溫擴增聚合酶

Bsu DNA polymerase

(Large fragment, 5 U/μL)

11079ES

具有配對和鏈轉移活性的重組酶

T4 UvsX Recombinase(2 μg/μL)

11080ES

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