HEK293細胞在生物制藥領域的應用

HEK293細胞系是人胚胎腎細胞系，具有與人類細胞相似的翻譯后修飾系統，能夠生產出更接近天然人類蛋白的重組蛋白。其在生物制藥領域應用廣泛，尤其是在細胞和基因治療（CGT）產品生產中占據重要地位。許多治療性病毒載體，如慢病毒、腺相關病毒等，都在 HEK293 細胞中生產。隨著CGT領域的迅速發展，HEK293及其衍生細胞的應用前景將更加廣闊。

殘留DNA風險及法規監管要求

WHO和各國藥物注冊監管機構均對生物制品中外源宿主DNA殘留提出了監測和控制要求，以確保生物制品的安全性及質量可控性。

WHO和美國FDA現行指導方針推薦成品中殘留DNA不高于10 ng/劑，美國FDA還指出生物制品宿主細胞DNA殘留DNA不高于100 pg/劑。歐洲藥典通則規定生物制品殘留DNA限度大多為不超過10 ng/劑。中國藥典2020年版三部規定，以細胞基質生產的生物制劑外源宿主細胞DNA殘留量不能超過100 pg/劑，以細菌或真菌基質生產的疫苗DNA殘留量不能超過10 ng/劑。

除需對DNA的殘留量進行控制外，DNA殘留片段大小分布也是確定其相關風險因素的重要指標。有研究表明，一個功能基因至少在200 bp以上，因此大于200 bp有可能會有一定的致病性，而且殘留DNA片段越大，生物制品的風險等級越高。

SV40LTA & E1A 殘留 DNA 的法規監管要求

HEK293T細胞是HEK293細胞系的衍生物，通過表達一個溫度敏感的SV40大T抗原突變體而建立。SV40是一種致瘤病毒，其大T抗原（LTA）序列和腺病毒E1A序列具有潛在安全性風險。CDE（國家藥品監督管理局藥品審評中心）頒布的相關指導原則要求，對包裝病毒載體用細胞庫（如HEK293T細胞）攜帶的Adv E1A序列和SV40大T 抗原序列等具有潛在安全性風險的特定轉化序列，均應進行殘留控制。

HEK293相關殘留檢測解決方案

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HEK293宿主殘留檢測

試劑盒線性范圍為：30fg/μL~300pg/μL，R²=1，擴增效率為100.45%，各濃度檢測值CV<15%。

圖 1.HEK293 DNA標曲線性圖（上）和擴增曲線線性圖譜（下）

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HEK293宿主殘留片段分析

試劑盒含有四種不同長度的擴增片段：82 bp、133 bp、227 bp、515 bp，四片段線性范圍均為30 fg/μL~300 pg/μL，R²＞0.99，擴增效率在90%~110%之間，各濃度檢測值CV<15%。

圖2 .82 bp擴增曲線圖譜（上）和133 bp擴增曲線圖譜（下）

圖3 .227 bp擴增曲線圖譜（上）和515 bp擴增曲線圖譜（下）

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SV40LTA & E1A 殘留檢測

SV40LTA線性范圍在1.8×10¹~1.8×10⁵copies/μL，R²=1，擴增效率為100.25%，各濃度檢測值CV<15%；

E1A線性范圍在1.8×10¹~1.8×105copies/μL，R²=1，擴增效率為100.25%，各濃度檢測值CV<15%。

圖4 .SV40LTA擴增曲線圖譜（左）和E1A擴增曲線圖譜（右）

產品特點

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符合法規：按照法規要求進行全面驗證，可提供驗證報告；

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保障品質：試劑盒原材料全自主研發，qPCR Mix等酶產品在超潔凈酶工廠生產；

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精密度高：批內重復性高，批間差異?。?/p>

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專屬性強：特異性檢測不受其他外源基因組DNA干擾。

產品詳情