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胱天蛋白酶Caspase 熒光底物系列產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)方案

作者:西安百螢生物科技有限公司 2023-08-15T00:00 (訪問量:16871)

產(chǎn)品型號:13406.13407.13408.13409

FITC-C6(C3)-DEVD-FMK能提供簡便靈敏的方法對活細(xì)胞中對的caspase進(jìn)行檢測。FITC-C6(C3)-DEVD-FMK在凋亡細(xì)胞中具有通透性,性和不可逆結(jié)合的caspase-3的特點(diǎn),是帶有FITC熒光標(biāo)記的caspase-3抑制劑。FITC標(biāo)記能直接通過熒光顯微鏡,流式細(xì)胞儀或者熒光酶標(biāo)儀測定的Caspase。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商,為您提供優(yōu)質(zhì)的胱天蛋白酶Caspase 3/7熒光底物 FITC-C6(C3)-DEVD-FMK 綠。

實(shí)驗(yàn)方案

操作方法

以下協(xié)議僅提供指導(dǎo),應(yīng)根據(jù)您的特定需求進(jìn)行修改。

使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的常規(guī)解決方案胱天蛋白酶測定

1.在DMSO中準(zhǔn)備10 mM的儲備溶液。

2.如下準(zhǔn)備2X半胱天冬酶底物(50 μM)分析溶液:50 μL底物原液,100 μL DTT(1M),400 μL EDTA(100 mM),10 mL Tris Buffer(20 mM),pH = 7.4。

3.將等體積的半胱天冬酶標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合,并在室溫下孵育至少1小時。

4.使用熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光,或使用酶標(biāo)儀監(jiān)測吸光度。?

使用細(xì)胞滲透性FMK Caspase探針的細(xì)胞Caspase測定

1.在DMSO中準(zhǔn)備2-5 mM的儲備溶液。

2.根據(jù)需要處理細(xì)胞。

3.通過用20 mM Hepes緩沖液(HHBS)在Hanks中稀釋DMSO儲備溶液(來自步驟2.1),制備2X滲透性半胱天冬酶底物(20 μM)分析溶液。

4.將等體積的處理過的細(xì)胞與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合(來自步驟2.3),并在37°C,5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育細(xì)胞至少1小時。

5.用HHBS清洗細(xì)胞至少一次。

6.通過流式細(xì)胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光強(qiáng)度。?

使用細(xì)胞滲透性FMK Caspase探針進(jìn)行細(xì)胞半胱天冬酶測定(僅適用于#13470-13476)

1.通過向小瓶中加入50 μL DMSO制備250X儲備液。

2.根據(jù)需要處理細(xì)胞。

3.以1:250的比例將250 X DMSO儲備溶液添加到細(xì)胞溶液中(例如2 μL至500 μL細(xì)胞),并將細(xì)胞在37°C,5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育1小時。

4.用HHBS清洗細(xì)胞至少一次。

5.通過流式細(xì)胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標(biāo)儀監(jiān)測熒光強(qiáng)度。

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