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細(xì)胞凋亡系列產(chǎn)品

細(xì)胞凋亡（apoptosis）一般是指機(jī)體細(xì)胞在發(fā)育過程中或在某些因素作用下，通過細(xì)胞內(nèi)基因及其產(chǎn)物的調(diào)控而發(fā)生的一種程序性細(xì)胞死亡(programmed cell death)。細(xì)胞凋亡對胚胎發(fā)育及形態(tài)發(fā)生（morphogenesis）、組織內(nèi)正常細(xì)胞群的穩(wěn)定、機(jī)體的防御和免疫反應(yīng)、疾病或中毒時引起的細(xì)胞損傷、老化、腫瘤的發(fā)生進(jìn)展起著重要作用，并具有潛在的治療意義。

細(xì)胞凋亡途徑中各事件的發(fā)生是有時序性的，即各事件按先后順序依次發(fā)生，最終導(dǎo)致凋亡小體的出現(xiàn)，細(xì)胞隨著發(fā)生凋亡。

其典型特征如下：
早期凋亡：細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，磷脂酰絲氨酸外翻；
早中期凋亡：細(xì)胞質(zhì)密度增加，線粒體膜電位消失細(xì)胞膜，通透性改變，釋放細(xì)胞色素C到胞漿中；

中晚期凋亡：細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)；

晚期凋亡：DNA降解為180~200bp片段大小。

圖1：細(xì)胞凋亡途徑各時序性事件發(fā)生及檢測方法

一、凋亡早期：Annexin-V/PI雙染色法（PS在細(xì)胞外膜上的檢測）

在正常的活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，細(xì)胞發(fā)生凋亡時，細(xì)胞膜發(fā)生變化，PS從細(xì)胞膜的內(nèi)表面翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的外表面。Annexin-V（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36 KD的Ca²⁺依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合。用熒光素（FITC、Alexa Fluor488等）標(biāo)記的Annexin-V作為探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡即可鑒別凋亡細(xì)胞和活細(xì)胞。

壞死的細(xì)胞PS同樣也會從細(xì)胞膜的內(nèi)表面翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的外表面，Annexin-V也能識別壞死細(xì)胞表面的PS,所以Annexin-V無法區(qū)分壞死細(xì)胞和凋亡細(xì)胞。另外碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，能夠與細(xì)胞內(nèi)DNA結(jié)合，而且它不能透過完整的細(xì)胞膜。早期凋亡細(xì)胞和活細(xì)胞的細(xì)胞膜仍然完整，PI染料無法自由通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與DNA結(jié)合，所以PI染料無法標(biāo)記凋亡細(xì)胞和活細(xì)胞，而PI染料卻能夠通過壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜與細(xì)胞內(nèi)的DNA結(jié)合，壞死細(xì)胞內(nèi)的PI染料被488nm激光激發(fā)后會發(fā)射紅熒光，被相應(yīng)通道接收。所以Annexin V和PI同時使用，就可以區(qū)分活細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞。

圖2：Annexin-V/PI雙染色后流式檢測結(jié)果分析