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認識PEI ? 聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)有被稱作為聚亞乙基亞胺、聚氮雜環丙烷,是一種水溶性較高的分子聚合物。PEI分子結構中含有伯胺、仲胺、叔胺等基因,具有較高的化學反應性,是目前已知的電荷密度最大的陽離子有機高分子材料。

PEI由于具有高附著性、高吸附性、高陽離子性、高反應性等優點,當前主要被應用在涂料、油墨、膠粘劑、纖維處理、污水處理等領域,在醫藥方面也得到越來越廣泛的應用。用于基因的遞送可以追溯到1995年,由Otman Boussif首次報告可用作非病毒載體使用,隨后越來越多的研究者參與到PEI作為轉染試劑的研究。與脂質體及其他非病毒載體相比,PEI陽離子密度高、性質穩定、結構靈活、生物相容性更好、細胞毒性更小。
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PEI轉染的原理 ? PEI聚乙烯亞胺是目前研究最廣泛的陽離子聚合物非病毒基因載體,它是由單體(-CH,CH,-NH-)構成的具有伯胺﹑仲胺和叔胺基團的水溶性聚合物。PEI單體中每3個原子含1個氮,并構成同的胺基。每相隔二個碳原子,即每第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的質子海綿(proton sponge)體。這是PEI有較強的結合DNA和黏附細胞并作為基因轉導載體的重要原因。
圖 pH值與質子化關系
(源自:doi.org/10.1021/acs.macromol.0c01501)
PEI 能將 DNA 縮合成帶正電荷的微粒,這些微??梢责ず系綆в胸撾姾傻募毎砻鏆埢?,并通過胞吞作用進入細胞。一旦進入細胞,胺的質子化導致反離子大量涌入以及滲透勢降低,在低pH環境中實現DNA胞內釋放。最被接受的觀點是PEI上未質子化的胺可以在與膜結合的細胞器(如溶酶體)中吸收氫離子,這將導致更多氫離子的流入,同時帶來更多的氯離子和水,誘發滲透溶脹。而質子化胺之間的排斥引起PEI構象的改變,上述變化導致的滲透膨脹使囊泡釋放聚合物與 DNA 形成的復合物進入細胞質。復合物拆解后,DNA 能自由的融合到細胞核中。
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翌圣PEI使用的特點
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1.?純化學合成,不含動物源成分;
2.?擁有細胞毒性低、轉染效率高;
3.?兼容抗生素與血清;
4.?在HEK293等細胞中基因表達效率較高,特別適合多質粒的共同轉染,用于重組病毒載體的生產,以及重組蛋白的瞬時表達生產。
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翌圣PEI使用的實例
1.?懸浮細胞293F的重組蛋白表達
培養條件:100μg/ml青霉素-鏈霉素+SMM 293-T II無血清培養基+37°C、5% CO2條件下培養
細胞密度:2.0-3.0×106?cell/ml
5天后,收集培養基,通過Ni親和層析和大小排阻層析純化重組蛋白。
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2.?慢病毒包裝
細胞:293T
收獲時間:48h
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? PEI使用常見問題
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Q1:多配置一點母液凍存起來是否會延長效期?
A:不建議凍存,儲存液4℃保存3個月
Q2:轉染后是否需要換液?
A:若轉染前進行了換液,可不進行換液,若需要換液可在轉染后6-8h可以進行換液。
Q3:轉染的時候是否需要無血清培養基培養?
A:制備復合物的時候需要使用無血清培養基,加入細胞中的時候不要求無血清培養。
? 產品訂購 應用場景 名稱 貨號 規格 細胞類型:貼壁/懸浮 40815ES03 1 g 40815ES08 5×1 g 細胞類型:貼壁/懸浮 40816ES02 100 mg 40816ES03 1 g 細胞類型:293 40820ES04 1.5 mL 40820ES10 10 mL 40820ES60 100 mL ?
核酸類型:DNA
核酸類型:DNA
核酸類型:DNA
用途:AAV/LV載體研發與工藝開發
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相關產品 應用場景 名稱 貨號 規格 細胞類型:貼壁/懸浮 核酸類型:DNA、siRNA 40802ES02 0.5 mL 40802ES03 1.0 mL 40802ES08 5×1mL 細胞類型:貼壁/懸浮 40803ES70 200 T 用途:病毒感染、DNA轉染 40804ES76 500 μL 40804ES86 5×500 μL 細胞類型:懸浮 40805ES02 0.5 mL 40805ES03 1.0 mL 40805ES08 5×1 mL 細胞類型:貼壁/懸浮 40806ES01 0.1 mL 40806ES02 0.5 mL 40806ES03 1.0 mL 細胞類型:貼壁/懸浮 40808ES02 0.5 mL 40808ES03 1 mL 40808ES08 5×1 mL 細胞類型:貼壁/懸浮 40809ES01 0.1 mL 40809ES03 1 mL ? 客戶使用該產品發表的科研文獻(不完全統計:部分) ? [1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI is a colonic crypt receptor for TcdB from hypervirulent clade 2 C.?difficile. Cell. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584) [2] Chen Y, Luo R, Li J, et al. Intrinsic Radical Species Scavenging Activities of Tea Polyphenols Nanoparticles Block Pyroptosis in Endotoxin-Induced Sepsis [published correction appears in ACS Nano. 2022 Mar 3;:]. ACS Nano. 2022;16(2):2429-2441. doi:10.1021/acsnano.1c08913(IF:15.881) [3] Qin J, Cai Y, Xu Z, et al. Molecular mechanism of agonism and inverse agonism in ghrelin receptor. Nat Commun. 2022;13(1):300. Published 2022 Jan 13. doi:10.1038/s41467-022-27975-9(IF:14.919) [4] Xiao RW, Wang F, Wang TM, et al. Rare POLN mutations confer risk for familial nasopharyngeal carcinoma through weakened Epstein-Barr virus lytic replication. EBioMedicine. 2022;84:104267. doi:10.1016/j.ebiom.2022.104267(IF:11.205) [5] Chen ZH, Yan SM, Chen XX, et al. The genomic architecture of EBV and infected gastric tissue from precursor lesions to carcinoma. Genome Med. 2021;13(1):146. Published 2021 Sep 7. doi:10.1186/s13073-021-00963-2(IF:11.117) [6]?
核酸類型:DNA
核酸類型:DNA、siRNA
核酸類型:siRNA、miRNA
核酸類型:DNA、siRNA、miRNA
核酸類型:mRNA
