聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)在細胞轉染中的應用-產品資訊-資訊-生物在線

聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)在細胞轉染中的應用

作者:翌圣生物科技(上海)股份有限公司 2022-12-29T16:19 (訪問量:7558)

?

?

認識PEI

?

?

聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI有被稱作為聚亞乙基亞胺、聚氮雜環丙烷,是一種水溶性較高的分子聚合物。PEI分子結構中含有伯胺、仲胺、叔胺等基因,具有較高的化學反應性,是目前已知的電荷密度最大的陽離子有機高分子材料。

PEI由于具有高附著性、高吸附性、高陽離子性、高反應性等優點,當前主要被應用在涂料、油墨、膠粘劑、纖維處理、污水處理等領域,在醫藥方面也得到越來越廣泛的應用。用于基因的遞送可以追溯到1995年,由Otman Boussif首次報告可用作非病毒載體使用,隨后越來越多的研究者參與到PEI作為轉染試劑的研究。與脂質體及其他非病毒載體相比,PEI陽離子密度高、性質穩定、結構靈活、生物相容性更好、細胞毒性更小。

?

?
?

PEI轉染的原理

?

?

PEI聚乙烯亞胺是目前研究最廣泛的陽離子聚合物非病毒基因載體,它是由單體(-CH,CH,-NH-)構成的具有伯胺﹑仲胺和叔胺基團的水溶性聚合物。PEI單體中每3個原子含1個氮,并構成同的胺基。每相隔二個碳原子,即每第三個原子都是質子化的氨基氮原子,使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的質子海綿(proton sponge)體。這是PEI有較強的結合DNA和黏附細胞并作為基因轉導載體的重要原因。

pH值與質子化關系

(源自:doi.org/10.1021/acs.macromol.0c01501

PEI 能將 DNA 縮合成帶正電荷的微粒,這些微??梢责ず系綆в胸撾姾傻募毎砻鏆埢?,并通過胞吞作用進入細胞。一旦進入細胞,胺的質子化導致反離子大量涌入以及滲透勢降低,在低pH環境中實現DNA胞內釋放。最被接受的觀點是PEI上未質子化的胺可以在與膜結合的細胞器(如溶酶體)中吸收氫離子,這將導致更多氫離子的流入,同時帶來更多的氯離子和水,誘發滲透溶脹。而質子化胺之間的排斥引起PEI構象的改變,上述變化導致的滲透膨脹使囊泡釋放聚合物與 DNA 形成的復合物進入細胞質。復合物拆解后,DNA 能自由的融合到細胞核中。

?

?

?
?
?

翌圣PEI使用的特點

?

?

1.?純化學合成,不含動物源成分;

2.?擁有細胞毒性低、轉染效率高

3.?兼容抗生素與血清;

4.?HEK293等細胞中基因表達效率較高,特別適合多質粒的共同轉染,用于重組病毒載體的生產,以及重組蛋白的瞬時表達生產。

?

?

?
?

翌圣PEI使用的實例

?

1.?懸浮細胞293F的重組蛋白表達

培養條件:100μg/ml青霉素-鏈霉素+SMM 293-T II無血清培養基+37°C、5% CO2條件下培養

細胞密度:2.0-3.0×106?cell/ml

5天后,收集培養基,通過Ni親和層析和大小排阻層析純化重組蛋白。

?

?

2.?慢病毒包裝

細胞:293T

收獲時間:48h

?

?

?

?
?

PEI使用常見問題

?

?

Q1:多配置一點母液凍存起來是否會延長效期?

A:不建議凍存,儲存液4℃保存3個月

Q2:轉染后是否需要換液?

A:若轉染前進行了換液,可不進行換液,若需要換液可在轉染后6-8h可以進行換液。

Q3:轉染的時候是否需要無血清培養基培養?

A:制備復合物的時候需要使用無血清培養基,加入細胞中的時候不要求無血清培養

?

?

產品訂購

?

應用場景

名稱

貨號

規格

細胞類型:貼壁/懸浮
核酸類型:DNA

PEI轉染試劑MW25000

40815ES03

1 g

40815ES08

5×1 g

細胞類型:貼壁/懸浮
核酸類型:DNA

線性PEI轉染試劑(速溶型)MW40000

40816ES02

100 mg

40816ES03

1 g

細胞類型:293
核酸類型:DNA
用途:AAV/LV載體研發與工藝開發

Hieff Trans??PEI轉染試劑

40820ES04

1.5 mL

40820ES10

10 mL

40820ES60

100 mL

?

?

?

?
?

相關產品

?

應用場景

名稱

貨號

規格

細胞類型:貼壁/懸浮

核酸類型:DNAsiRNA

Hieff Trans??脂質體核酸轉染試劑

40802ES02

0.5 mL

40802ES03

1.0 mL

40802ES08

5×1mL

細胞類型:貼壁/懸浮
核酸類型:DNA

磷酸鈣法細胞轉染試劑

40803ES70

200 T

用途:病毒感染、DNA轉染

聚凝胺(10 mg/ml

40804ES76

500 μL

40804ES86

5×500 μL

細胞類型:懸浮
核酸類型:DNA、siRNA

Hieff Trans??懸浮細胞專用脂質體核酸轉染試劑

40805ES02

0.5 mL

40805ES03

1.0 mL

40805ES08

5×1 mL

細胞類型:貼壁/懸浮
核酸類型:siRNAmiRNA

Hieff Trans??siRNA/miRNA體外轉染試劑

40806ES01

0.1 mL

40806ES02

0.5 mL

40806ES03

1.0 mL

細胞類型:貼壁/懸浮
核酸類型:DNAsiRNA、miRNA

Hieff Trans??通用型轉染試劑

40808ES02

0.5 mL

40808ES03

1 mL

40808ES08

5×1 mL

細胞類型:貼壁/懸浮
核酸類型:mRNA

Hieff Trans??mRNA轉染試劑

40809ES01

0.1 mL

40809ES03

1 mL

?

客戶使用該產品發表的科研文獻(不完全統計:部分)

?

[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI is a colonic crypt receptor for TcdB from hypervirulent clade 2 C.?difficile. Cell. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)

[2] Chen Y, Luo R, Li J, et al. Intrinsic Radical Species Scavenging Activities of Tea Polyphenols Nanoparticles Block Pyroptosis in Endotoxin-Induced Sepsis [published correction appears in ACS Nano. 2022 Mar 3;:]. ACS Nano. 2022;16(2):2429-2441. doi:10.1021/acsnano.1c08913(IF:15.881)

[3] Qin J, Cai Y, Xu Z, et al. Molecular mechanism of agonism and inverse agonism in ghrelin receptor. Nat Commun. 2022;13(1):300. Published 2022 Jan 13. doi:10.1038/s41467-022-27975-9(IF:14.919)

[4] Xiao RW, Wang F, Wang TM, et al. Rare POLN mutations confer risk for familial nasopharyngeal carcinoma through weakened Epstein-Barr virus lytic replication. EBioMedicine. 2022;84:104267. doi:10.1016/j.ebiom.2022.104267(IF:11.205)

[5] Chen ZH, Yan SM, Chen XX, et al. The genomic architecture of EBV and infected gastric tissue from precursor lesions to carcinoma. Genome Med. 2021;13(1):146. Published 2021 Sep 7. doi:10.1186/s13073-021-00963-2(IF:11.117)

[6]?

翌圣生物科技(上海)股份有限公司 商家主頁

地 址: 上海市浦東新區天雄路166弄一號樓三層南單元

聯系人: 李自轉

電 話: 400-6111-883、021-34615995-8075

傳 真: 021-34615995-188

Email:lizizhuan@yeasen.com

相關咨詢
ADVERTISEMENT