磷酸鈣轉(zhuǎn)染試劑是一種經(jīng)典的基因轉(zhuǎn)染工具，它通過形成DNA-磷酸鈣共沉淀物，促進(jìn)細(xì)胞通過內(nèi)吞作用吸收DNA，適用于多種真核細(xì)胞的瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，以其操作簡便、成本低廉、轉(zhuǎn)染效率高而廣受歡迎。
基本原理
01
DNA與磷酸鈣的結(jié)合
在含有磷酸鹽的緩沖液（HBS）中，加入氯化鈣（CaCl2）溶液和含有目的DNA的溶液。
DNA分子在生理pH條件下帶負(fù)電荷，而磷酸鈣帶正電荷，通過靜電作用，DNA與磷酸鈣結(jié)合。
02
形成DNA-磷酸鈣共沉淀物
當(dāng)DNA與磷酸鈣混合后，會形成DNA-磷酸鈣共沉淀物。這些沉淀物是微小的DNA-磷酸鈣復(fù)合體，它們可以吸附到細(xì)胞表面。03
細(xì)胞吸收共沉淀物
將形成的DNA-磷酸鈣共沉淀物添加到待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞培養(yǎng)基中。細(xì)胞通過內(nèi)吞作用吸收這些共沉淀物。04
DNA進(jìn)入細(xì)胞
內(nèi)吞后的DNA-磷酸鈣復(fù)合體被包裹在內(nèi)吞體內(nèi)，隨后內(nèi)吞體與溶酶體融合，DNA被釋放到細(xì)胞質(zhì)中。05
DNA的表達(dá)
釋放到細(xì)胞質(zhì)中的DNA可以通過細(xì)胞的核孔復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞核，進(jìn)行蛋白表達(dá)。
翌圣生物的磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，基于傳統(tǒng)方法優(yōu)化，提高轉(zhuǎn)染效率，減少細(xì)胞毒性，特別適合HEK293、293T和Hela等細(xì)胞系。適用于瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，即開即用，操作簡便。
產(chǎn)品特點(diǎn)
02
·
性能穩(wěn)定：可在2-8℃保存，有效期2年；
·
轉(zhuǎn)染效率高：在293T細(xì)胞上陽性率高達(dá)95%；
·
毒性低：對細(xì)胞基本無毒，轉(zhuǎn)染后不影響細(xì)胞正常生長。
·
結(jié)果展示
03
6孔板中，使用翌圣磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑在293T細(xì)胞上轉(zhuǎn)染GFP質(zhì)粒， 按照轉(zhuǎn)染試劑說明書進(jìn)行操作；轉(zhuǎn)染48 h后，熒光倒置顯微鏡下觀察并拍照。結(jié)果顯示，翌圣磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑在293T細(xì)胞上的轉(zhuǎn)染效率高達(dá)95%以上。
操作方法
04 01
按照60％左右的密度種植細(xì)胞入培養(yǎng)皿（瓶），細(xì)胞貼壁生長12-24小時(shí)后即可準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染；
02
準(zhǔn)備1.5 mL離心管，按照下表指示，依次加入DNA、HBS和CaCl2；
03 振蕩混勻后室溫靜置15分鐘；04
吹打3－5 次后均勻加到待轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)液中，輕輕搖動培養(yǎng)皿（瓶）；
05 放置37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；06 轉(zhuǎn)染6小時(shí)后換液；07 24-48小時(shí)檢測目的蛋白質(zhì)的表達(dá)。
不同培養(yǎng)容器試劑使用量（僅供參考）
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細(xì)胞培養(yǎng)試劑 |
6孔板 |
T-25培養(yǎng)瓶 |
10 cm平皿 |
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培養(yǎng)基（mL） |
2 |
5 |
10 |
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DNA（μg） |
2 |
4 |
7.5 |
|
HBS（mL） |
0.2 |
0.5 |
1 |
|
CaCl2（μL） |
14 |
35 |
70 |
產(chǎn)品信息
05
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
產(chǎn)品貨號 |
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Hieff Trans®Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑 |
200T |
40803ES70 |
相關(guān)產(chǎn)品
06
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
產(chǎn)品貨號 |
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Hieff Trans® Liposomal Transfection Reagent 脂質(zhì)體核酸轉(zhuǎn)染試劑 |
100 μL/1 mL |
40802ES01/40802ES03 |
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500 μL/5×500 μL |
40804ES76/40804ES86 |
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Hieff Trans® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑 |
100 μL/1 mL |
40805ES01/40805ES03 |
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Hieff Trans® in vitro siRNA/miRNA Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑 |
100μL/1mL |
40806ES01/40806ES03 |
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0.5 mL /1 mL |
40808ES02/40808ES03 |
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100μL/1mL |
40809ES01/40809ES03 |
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1.5 mL /10 mL /100 mL |
40820ES04/40820ES10 /40820ES60 |
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10 mL /100 mL/1L |
40821ES10/40821ES60 /40821ES80 |
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1 mL /10 mL /100mL |
40823ES03/40823ES10 /40823ES60 |