磷酸鈣轉染試劑是一種經典的基因轉染工具，它通過形成DNA-磷酸鈣共沉淀物，促進細胞通過內吞作用吸收DNA，適用于多種真核細胞的瞬時和穩定轉染，以其操作簡便、成本低廉、轉染效率高而廣受歡迎。
基本原理
01
DNA與磷酸鈣的結合
在含有磷酸鹽的緩沖液（HBS）中，加入氯化鈣（CaCl2）溶液和含有目的DNA的溶液。
DNA分子在生理pH條件下帶負電荷，而磷酸鈣帶正電荷，通過靜電作用，DNA與磷酸鈣結合。
02
形成DNA-磷酸鈣共沉淀物
當DNA與磷酸鈣混合后，會形成DNA-磷酸鈣共沉淀物。這些沉淀物是微小的DNA-磷酸鈣復合體，它們可以吸附到細胞表面。03
細胞吸收共沉淀物
將形成的DNA-磷酸鈣共沉淀物添加到待轉染的細胞培養基中。細胞通過內吞作用吸收這些共沉淀物。04
DNA進入細胞
內吞后的DNA-磷酸鈣復合體被包裹在內吞體內，隨后內吞體與溶酶體融合，DNA被釋放到細胞質中。05
DNA的表達
釋放到細胞質中的DNA可以通過細胞的核孔復合體進入細胞核，進行蛋白表達。
翌圣生物的磷酸鈣法細胞轉染試劑，基于傳統方法優化，提高轉染效率，減少細胞毒性，特別適合HEK293、293T和Hela等細胞系。適用于瞬時和穩定轉染，即開即用，操作簡便。
產品特點
02
·
性能穩定：可在2-8℃保存，有效期2年；
·
轉染效率高：在293T細胞上陽性率高達95%；
·
毒性低：對細胞基本無毒，轉染后不影響細胞正常生長。
·
結果展示
03
6孔板中，使用翌圣磷酸鈣法細胞轉染試劑在293T細胞上轉染GFP質粒， 按照轉染試劑說明書進行操作；轉染48 h后，熒光倒置顯微鏡下觀察并拍照。結果顯示，翌圣磷酸鈣法細胞轉染試劑在293T細胞上的轉染效率高達95%以上。
操作方法
04 01
按照60％左右的密度種植細胞入培養皿（瓶），細胞貼壁生長12-24小時后即可準備轉染；
02
準備1.5 mL離心管，按照下表指示，依次加入DNA、HBS和CaCl2；
03 振蕩混勻后室溫靜置15分鐘；04
吹打3－5 次后均勻加到待轉染細胞的培養液中，輕輕搖動培養皿（瓶）；
05 放置37℃，5%CO2培養箱中進行細胞培養；06 轉染6小時后換液；07 24-48小時檢測目的蛋白質的表達。
不同培養容器試劑使用量（僅供參考）
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細胞培養試劑 |
6孔板 |
T-25培養瓶 |
10 cm平皿 |
|
培養基（mL） |
2 |
5 |
10 |
|
DNA（μg） |
2 |
4 |
7.5 |
|
HBS（mL） |
0.2 |
0.5 |
1 |
|
CaCl2（μL） |
14 |
35 |
70 |
產品信息
05
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產品名稱 |
產品規格 |
產品貨號 |
|
Hieff Trans®Calcium Phosphate Cell Transfection Kit 磷酸鈣法細胞轉染試劑 |
200T |
40803ES70 |
相關產品
06
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產品名稱 |
產品規格 |
產品貨號 |
|
100 μL/1 mL |
40802ES01/40802ES03 |
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500 μL/5×500 μL |
40804ES76/40804ES86 |
|
|
Hieff Trans® Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent轉染試劑 |
100 μL/1 mL |
40805ES01/40805ES03 |
|
100μL/1mL |
40806ES01/40806ES03 |
|
|
0.5 mL /1 mL |
40808ES02/40808ES03 |
|
|
100μL/1mL |
40809ES01/40809ES03 |
|
|
1.5 mL /10 mL /100 mL |
40820ES04/40820ES10 /40820ES60 |
|
|
10 mL /100 mL/1L |
40821ES10/40821ES60 /40821ES80 |
|
|
1 mL /10 mL /100mL |
40823ES03/40823ES10 /40823ES60 |