產(chǎn)品推薦│耐熱SSB助您的PCR產(chǎn)量更高更快
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在PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，雙鏈DNA解鏈?zhǔn)潜夭豢缮俚囊徊剑忾_(kāi)的單鏈DNA會(huì)重新配對(duì)形成雙鏈DNA或自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，又或者被降解，導(dǎo)致不能穩(wěn)定擴(kuò)增DNA。為解決這個(gè)問(wèn)題，單鏈DNA結(jié)合蛋白(single-stranded DNA-binding protein, SSB)就應(yīng)運(yùn)而生了。
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SSB具有高度的親和力，能夠迅速結(jié)合到DNA 的單鏈上，形成SSB-DNA復(fù)合體防止DNA再結(jié)合成雙鏈，使螺旋二聚體變得不穩(wěn)定，促進(jìn)引物和聚合酶與目標(biāo)DNA的結(jié)合，從而提高PCR的產(chǎn)量。正因如此，SSB蛋白被廣泛地用于各種基于PCR技術(shù)的PCR、RT-PCR、DNA測(cè)序等領(lǐng)域。
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圖1.SSB結(jié)合ssDNA示意圖
（圖片源自：DOI: 10.1038/4611067a.）
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PCR擴(kuò)增必須經(jīng)歷高溫變性過(guò)程，這要求SSB蛋白具有熱穩(wěn)定性，能夠在高溫條件下仍然保持活性。為滿(mǎn)足這一需求，翌圣通過(guò)ZymeEditor?酶改造平臺(tái)對(duì)來(lái)源于嗜熱細(xì)菌的SSB進(jìn)行重組表達(dá)，獲得高純度耐高溫的SSB（Cat#14561ES）。翌圣SSB能夠在高溫條件下保持穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)與功能，具有提高PCR反應(yīng)的產(chǎn)量和特異性、提高RT-PCR中反轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)量和延伸能力以及改善強(qiáng)二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū)域的DNA測(cè)序的特點(diǎn)。
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部分?jǐn)?shù)據(jù)展示
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01
無(wú)外切酶、切口酶殘留
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?將0.5、2 μg的SSB分別與底物DNA在37℃孵育4 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA譜帶不發(fā)生變化，表明SSB無(wú)外切酶及切口酶殘留。
圖2. 外切酶和切口酶殘留檢測(cè)
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02
無(wú)RNase殘留
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將0.5 μg的SSB與底物RNA在37℃孵育4 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA譜帶不發(fā)生變化，表明SSB無(wú)RNase殘留。
圖3. RNase殘留檢測(cè)
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