在基因功能研究與藥物開發(fā)領(lǐng)域，精準(zhǔn)解析基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制是探索生命奧秘的關(guān)鍵一步。為滿足科研工作者對(duì)高效、可靠檢測(cè)工具的需求，我們正式推出雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)服務(wù)！通過(guò)國(guó)際領(lǐng)先的技術(shù)平臺(tái)和標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，助您快速驗(yàn)證啟動(dòng)子活性、miRNA靶向作用、信號(hào)通路調(diào)控等關(guān)鍵問(wèn)題，讓基因調(diào)控研究更精準(zhǔn)、更高效！

反應(yīng)原理

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)是指以熒光素（luciferin）和腔腸素（coelenterazine）為底物，檢測(cè)螢火蟲熒光素酶（firefly luciferase）和海腎熒光素酶活性的一種雙報(bào)告系統(tǒng)。螢火蟲熒光素酶作為報(bào)告基因，催化luciferin 氧化成oxyluciferin，在luciferin 氧化的過(guò)程中，會(huì)發(fā)出生物熒光；海腎熒光素酶作為內(nèi)參基因，催化coelenterazine 氧化成coelenteramide，在coelenterazine 氧化的過(guò)程中，同樣也會(huì)發(fā)出生物熒光。通過(guò)熒光測(cè)定儀測(cè)定反應(yīng)過(guò)程中釋放的生物熒光或使用酶標(biāo)儀來(lái)檢測(cè)熒光素酶活性的變化。

圖1.熒光素酶生物發(fā)光化學(xué)反應(yīng)示意圖

為什么選擇雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)？

雙熒光素酶系統(tǒng)（Firefly & Renilla Luciferase）是基因調(diào)控研究的“黃金搭檔”，通過(guò)雙信號(hào)校正技術(shù)，可有效消除實(shí)驗(yàn)誤差（如細(xì)胞數(shù)量、轉(zhuǎn)染效率等干擾），顯著提升數(shù)據(jù)穩(wěn)定性和靈敏度。

適用場(chǎng)景

· 啟動(dòng)子/增強(qiáng)子活性分析：定位關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域，篩選功能性SNP位點(diǎn)；

· miRNA與靶基因互作驗(yàn)證：確認(rèn)miRNA對(duì)目標(biāo)mRNA的直接調(diào)控關(guān)系；

· 信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制研究：探究轉(zhuǎn)錄因子（如NF-κB、STAT3）對(duì)下游基因的調(diào)控作用；

· 藥物篩選與機(jī)制解析：評(píng)估化合物或生物藥對(duì)特定基因表達(dá)的調(diào)控效果。

服務(wù)優(yōu)勢(shì)

 專業(yè)團(tuán)隊(duì)護(hù)航，數(shù)據(jù)精準(zhǔn)無(wú)憂

· 個(gè)性化方案設(shè)計(jì)：支持載體構(gòu)建、突變體設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化等全流程服務(wù)；

· 結(jié)果有保障：團(tuán)隊(duì)精通各類應(yīng)用場(chǎng)景驗(yàn)證，經(jīng)驗(yàn)豐富，全程提供技術(shù)解讀，售后無(wú)憂；

· 快速交付周期：標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)4-5周內(nèi)提供原始數(shù)據(jù)及分析報(bào)告。

服務(wù)流程

三步輕松完成實(shí)驗(yàn)

01

客戶提供

待研究基因及物種信息、結(jié)合位點(diǎn)信息（翌圣可免費(fèi)預(yù)測(cè)結(jié)合位點(diǎn)）。02

翌圣服務(wù)

方案設(shè)計(jì)、序列合成、質(zhì)粒構(gòu)建、轉(zhuǎn)染、報(bào)告基因檢測(cè)。

03客戶所得

項(xiàng)目所得質(zhì)粒及菌液、項(xiàng)目報(bào)告。

應(yīng)用案例分享

雙熒光素酶驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子區(qū)調(diào)控作用

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基本原理

轉(zhuǎn)錄因子是一類參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的重要調(diào)節(jié)因子。不同轉(zhuǎn)錄因子的DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域識(shí)別不同基因啟動(dòng)子區(qū)特定的堿基序列，行使抑制或激活該基因轉(zhuǎn)錄的功能。如圖3，將目的基因啟動(dòng)子區(qū)域（通常取轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)TSS 上游-2000bp）、或針對(duì)結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行突變、或分段截?cái)嘈蛄校瑯?gòu)建到報(bào)告基因載體luciferase 的上游，共轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)錄因子過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，通過(guò)熒光素酶活反映轉(zhuǎn)錄因子對(duì)啟動(dòng)子活性的調(diào)控作用。

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常見(jiàn)載體及分組

常用載體：pGL3-Basic 、pGL3-Promoter

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常見(jiàn)檢測(cè)分組

1）轉(zhuǎn)錄因子NC + 啟動(dòng)子對(duì)照質(zhì)粒 + 海腎內(nèi)參質(zhì)粒；

2）轉(zhuǎn)錄因子NC + 啟動(dòng)子野生型質(zhì)粒 + 海腎內(nèi)參質(zhì)粒；

3）轉(zhuǎn)錄因子NC + 啟動(dòng)子突變型質(zhì)粒 + 海腎內(nèi)參質(zhì)粒；

4）轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒 + 啟動(dòng)子對(duì)照質(zhì)粒 + 海腎內(nèi)參質(zhì)粒；

5）轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒 + 啟動(dòng)子野生型質(zhì)粒 + 海腎內(nèi)參質(zhì)粒；

6）轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒 + 啟動(dòng)子突變型質(zhì)粒 + 海腎內(nèi)參質(zhì)粒。

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操作流程

1、啟動(dòng)子報(bào)告基因載體構(gòu)建：將目的基因構(gòu)建至雙熒光素酶報(bào)告基因載體的上，目的片段位于熒光素酶報(bào)告基因的上游，如構(gòu)建至pGL3-basic。
2、轉(zhuǎn)染細(xì)胞：將熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒與內(nèi)參報(bào)告質(zhì)粒和共轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞，由于內(nèi)參的啟動(dòng)子活性較強(qiáng)，通常報(bào)告質(zhì)粒與內(nèi)參質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染比例為10:1。
3、收集細(xì)胞：將裂解液加入細(xì)胞孔中，搖床常溫條件下?lián)u晃適當(dāng)時(shí)間后進(jìn)行離心，將上清轉(zhuǎn)移到新的管子中。
4、雙熒光素酶報(bào)告基因活性檢測(cè)：96 孔酶標(biāo)版中加入20 ul細(xì)胞裂解液上清，加入100 μL螢火蟲螢光素酶反應(yīng)液，震板混勻，檢測(cè)螢火蟲螢光素酶的活力，檢測(cè)盡量在30 min內(nèi)完成。加入100 μL海腎螢光素酶反應(yīng)液，震板混勻，檢測(cè)海腎螢光素酶的活力，檢測(cè)盡量在30 min內(nèi)完成。。
5、數(shù)據(jù)處理：首先將Firefly luciferase/Renila luciferase得出比值，即可得到不同處理組的相對(duì)luciferase活性。

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預(yù)期結(jié)果分析

（1）轉(zhuǎn)錄因子促進(jìn)靶基因啟動(dòng)子區(qū)轉(zhuǎn)錄活性

（2）轉(zhuǎn)錄因子抑制靶基因啟動(dòng)子區(qū)轉(zhuǎn)錄活性

服務(wù)內(nèi)容

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即日起至2025年3月31日，首單客戶可享9折優(yōu)惠，同時(shí)免費(fèi)贈(zèng)送實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)服務(wù)！

無(wú)論是基礎(chǔ)研究還是藥物開發(fā)項(xiàng)目，我們的雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)服務(wù)都將成為您探索基因調(diào)控機(jī)制的強(qiáng)力工具。

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