RNase A作為一種重要的核糖核酸內切酶,在分子生物學領域發揮著關鍵作用。其特異性降解RNA的能力使其在質粒DNA和基因組DNA制備、RNA酶保護分析、RNA干擾等實驗中具有廣泛的應用。翌圣生物的RNase A產品以其高活性、穩定性和廣泛的適用性,為相關領域的研究人員提供了可靠的選擇。隨著分子生物學技術的不斷發展,RNase A及其相關產品將在更多領域展現出其應用價值。
01
RNase A的來源
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動物來源
RNase A,即核糖核酸酶A,主要來源于牛胰腺。它是一種單鏈多肽化合物,含有4個二硫鍵,分子量約為13.7 kDa。這種酶具有高度的穩定性和廣泛的反應條件適應性,能夠在多種環境條件下保持其活性。牛胰來源的RNase A粉末無法完全去除DNase和蛋白酶,但是在RNase A配置成溶液的過程中進行加熱,可去除DNase和蛋白酶,后續可用于去除DNA樣品中殘留的RNA,或蛋白樣品中的核酸殘留。
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重組來源
重組核糖核酸酶A,His-tagged(rRNase A ,His-tagged)為來源于Bovine pancreas的RNase A基因在大腸桿菌中的表達產物,經包涵體變復性后,再經親和層析和離子交換層析等多步純化所得。純化的RNase A無DNase和蛋白酶污染,無動物源性??捎糜谌コ鼶NA樣品中殘留的RNA,或蛋白樣品中的核酸殘留。
02
RNase A的作用原理
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特異性識別底物
RNase A主要識別單鏈RNA分子中的嘧啶堿基(胞嘧啶和尿嘧啶)的3’端位置,并在其3’端進行切割。
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催化位點結合與水解反應
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反應條件
RNase A的作用條件相對寬松,pH值范圍在中性或弱堿性(pH=7.0~8.0),作用溫度在37℃左右。它具有廣泛的pH適用范圍和熱穩定性,且經過高溫或變性劑作用后也容易復性。此外,它在低濃度離子環境(NaCl/KCl)中可增強其活性,在高離子濃度中(>300 mM)其反應活性可能會被抑制。
03
RNase A的應用場景
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質粒DNA和基因組DNA制備
在質粒DNA和基因組DNA的制備過程中,RNA的存在可能會干擾后續實驗的結果。因此,在提取DNA時,通常會添加RNase A來降解樣品中的RNA分子,從而獲得純凈的DNA樣本。由于RNase A對DNA分子不具有降解作用,因此可以確保DNA分子的完整性和濃度不受影響。
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RNA酶保護分析
RNA酶保護分析法(RNase protection assay)是一種近年來發展起來的檢測RNA的雜交技術。其基本原理是利用單鏈RNA探針與待測的RNA樣品進行雜交形成RNA:RNA雙鏈分子,由于RNase A可專一性地降解未雜交的單鏈RNA,而雙鏈受到保護不被降解,經凝膠電泳可以確定目的RNA的長度。該方法靈敏度較Northern雜交法更高,并可進行較為準確的定量。
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RNA干擾研究
RNA干擾(RNAi)是一種通過小分子RNA(如siRNA、miRNA)調控基因表達的技術。在RNAi實驗中,外源或內源RNA可能干擾實驗效果。RNase A可降解非特異性RNA,降低背景噪音,從而提高RNAi的特異性和效率。
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蛋白質-RNA相互作用研究
在研究蛋白質與RNA的相互作用時,需去除未結合的RNA。RNase A可特異性降解游離RNA,保留與蛋白質結合的RNA,便于后續分析。例如,在RNA結合蛋白(RBP)的研究中,通過RNase A處理后,結合蛋白的RNA純度提高了50%,有助于解析蛋白質-RNA的相互作用機制。
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RNA疫苗研發
RNA疫苗的制備需確保RNA的完整性和純度。RNase A可用于去除制備過程中的RNA雜質,提高疫苗的質量和安全性。例如在新冠疫苗研發中,RNase A處理后的RNA疫苗在動物實驗中表現出更高的免疫原性和更低的副作用。
翌圣生物RNase A,來源于來源于牛胰腺,產品具有較高的酶活和穩定性。該產品有粉末形式和液體形式,干粉形式-25℃~-15℃儲存,有效期2年;液體形式-25℃~-15℃儲存,有效期1年。
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產品推薦
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產品介紹 |
酶活 |
貨號 |
規格 |
價格 |
應用 |
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Ribonuclease A(RNase A),from bovine pancreas 核糖核酸酶A,來源于牛胰腺;經色譜工藝制備,DNase 活性含量極低。為凍干粉劑。貯存溫度-25℃~-15℃。有效期2年。 |
≥80 Kunitz units/mg |
10407ES |
10407ES60:100 mg |
385 |
質粒DNA和基因組DNA制備、RNA酶保護分析、RNA干擾等實驗中具有廣泛的應用 |
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Ribonuclease A(RNase A),from bovine pancreas 核糖核酸酶A,來源于牛胰腺;DNase I Free;液體形式,RNase A濃度100 mg/mL 。貯存溫度-25℃~-15℃。有效期1年。 |
≥80 Kunitz units/mg |
10406ES |
10406ES03:1 mL |
685 |
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Ribonuclease A(RNase A),from bovine pancreas 核糖核酸酶A,來源于牛胰腺;DNase I Free;液體形式,RNase A濃度10 mg/mL 。貯存溫度-25℃~-15℃。有效期1年。 |
≥80 Kunitz units/mg |
10405ES |
10405ES03:1 mL |
85 |
