類器官的培養是一種利用干細胞技術，模擬人體內器官發育過程，構建出具有類似器官結構和功能的三維細胞培養模型。這種模型能夠幫助科學家更好地理解器官的發育、疾病的發生機制以及藥物的作用效果。類器官一般通過誘導和干預進行類器官的純化，傳代也是培養類器官不可缺少的步驟；

但是消化類器官總是會莫名奇妙的出問題 ，有些類器官半天消化不下來，有些類器官換個液都能給沖下來，類器官怎么消化，來看看我們的總結吧！

一、如何判斷類器官可以消化了，小啟經常采用以下三個方面來判斷：

1.更換新鮮的培養基后，第二天培養基就變黃了，并且類器官在4X鏡下整體有50%以上的匯合；

2. 有少部分類器官和細胞發生脫落現象，從Matrigel中脫離，漂浮在培養基中；

3. 細胞覆蓋Matrigel液滴的邊緣，顯微鏡下已經看不到Matrigel膠，整個底部都是遷移的類器官。

判斷好類器官可以進行消化了，我們就來整理下小啟在消化類器官踩的坑吧：

第一坑：打死都消化不下來的類器官：

腦癌類器官以培養時間長著稱，正常的培養沒個把月根本測不出類器官指數，于是消化成了這個細胞的難點 ，類器官培養的經驗教訓之一：培養的類器官在同一個孔中盡量不要時間太久， 越久越消化不下來，

培養超過一個月的類器官，不建議使用直接使用組織消化液消化，采用以下步驟消化類器官

1. 先用刮刀先把類器官刮下來，加適量的PBS洗滌后，收集到離心管中；

2. 采用100um的細胞濾網過濾，以攔截比較大塊的類器官；

3. 準備新的離心管，將濾網反轉用PBS沖洗，將大的類器官沖洗下來；

4. 將沖洗的類器官混懸液進行離心去除PBS，加入適量的組織消化液消化；37°水浴消化5分鐘后，用1000ul槍頭輕輕吹打20次左右，立刻加入同等的完全培養基終止。

5. 配平，1500轉離心3分，對于比較容易分散的類器官，如肝癌和腎癌類器官，可以采用瞬離的方法，瞬離的方法如下：設定轉速3000轉，配平，啟動離心機，當轉速達到3000轉后立即按下停止鍵，待離心機停止轉動后，拿出離心管。

                                       腦癌類器官消化后重新鋪板

第二坑：輕輕一碰就掉落的類器官

肝癌和滋養層是最容易掉落的類器官，即使有Matrigel給其吸附，但是稍不注意換個液都能掉落，前功盡棄，而且這類的類器官有趨光性，一旦Matrige稍微鋪的不均勻或者震板沒有做好，就大的很大，小的很小，而越大的越容易掉落，看著都惱火

                                      組織消化酶（啟達生物，貨號：SD0013)

消化容易脫落的類器官采用的方法：

1. 預熱組織消化酶，一定要預熱；

2. 去除舊的培養基，向每個孔中加入500ul預熱的組織消化酶，以從Matrigel中回收類器官

3. 輕輕吸取組織消化酶和Matrigel液滴混合物上下2-3次，將Matrigel和類器官從孔中移出。

4. 將混懸液轉移到新無菌15 mL離心管中，每個15mL離心管最多可容納8個孔的類器官（即：體積約為4-6mL）

5. 將混合物在37℃水浴中孵育5分鐘，偶爾旋轉試管以混合類器官消化酶;

6. 用1000ul移液管抽吸類器官混懸液20-30次，以機械方式破壞和分離類器官為單細胞

7. 用相同體積的完全類器官培養基中和組織消化溶液

8. 將試管在1500轉下離心3分鐘；

9. 鋪在預先準備的培養板中繼續培養或者凍存；