一做上293之類的小細胞染色就讓人抓狂 ,一洗就脫一洗就脫,所有的耐心都忍受不了它不負責任的脫落,讓人抓狂,快來試試以下的幾個小妙招吧,一個不行就多試幾個 ,總有一個適合您現在的細胞。
一、預處理器皿(讓表面先“粘人”)
1. 商用包被液5 min 迅速包被
使用我們的包被液(啟達生物,貨號:SD0044)直接鋪滿板底,37 ℃孵 5 min 即可吸出、晾干,隨后無菌 PBS 潤洗 1 次就能接細胞;哪怕易脫落的 293、P19Cl6 也能貼得牢牢的 。
使用包被液后(啟達生物 :SD0044):
2 、“血清打底”法
把 20% 血清培養基先加到孔里 37 ℃孵 30 min,讓血清中的纖連蛋白/玻連蛋白先吸附到塑料表面,再吸出換成常規培養基接細胞,貼壁率可瞬間提升 20–30% 。
3、鈣離子助攻
在接種液里額外加 2–4 mmol/L 無菌 CaCl?,Ca²?能促進整合素與基質蛋白結合,尤其適用于無血清或低血清體系。
二、接種技巧(讓細胞“愿意”留) 高密度“搶地盤”
接種密度提高 30–50%,細胞自己分泌胞外基質的量就足夠形成黏附網絡,特別適合原代或狀態一般的細胞;
三、先少后多“兩步法”
T25 瓶先只加 3 mL 培養基,讓細胞 8–12 h 內快速貼壁;然后再補到 5 mL,可顯著減少漂浮死細胞;
四、37 ℃+預充氣
把培養基提前 37 ℃預熱,并用 5% CO?/95% 空氣輕輕沖 1 min,讓 pH 落到 7.2 左右再接種,細胞 30 min 內就能伸展貼壁;
五、延長首次換液時間
貼壁弱的細胞接后 24 h 內不擾動,48 h 再首換,可讓胞外基質沉積更充分,脫落率下降一半;
六、濕度防氣泡
培養箱水盤始終保持 2/3 水位,濕度 >90%;氣泡區細胞會因“斷糧”而漂起,濕度夠高即可避免;
七、靜電小動作
冬天塑料板易帶靜電,拆包裝前用濕巾擦一下外壁或把板在超凈臺里“晾”2 min,可消除靜電對貼壁的干擾;
八、寫在最后
發現細胞還是成片脫落?別急著扔,先把培養基吸出,加 1 mL 血清的輕輕吹下漂浮細胞,重新按上面“高密度+包被液法 ”二步法再鋪一次,經常能“救”回 60% 以上。
細胞不貼壁,這樣處理,90% 的“貼不牢”問題都能解決;祝你的細胞乖乖貼壁、不再當“小漂漂”
