養了細胞后就會發現，即使是一瓶細胞，但是每個細胞的分裂時間卻不一致，有些已經分裂生長完成了，有些細胞還在分裂初始，但是在大部分實驗中，都需要細胞保持生長周期同步化，才能讓實驗數據更為精確。因此，只能進行人工干預啦。
1.有絲分裂搖脫法（Mitotic Shake-off）
原理：M期細胞變圓、貼附力下降，通過輕輕搖晃或拍擊培養瓶可使M期細胞脫落
操作流程：
1. 對數生長期細胞（密度5-8×10?/mL）
2. 加入諾考達唑 40-100 ng/mL
3. 培養10-14 h
4. 離心收集（300×g，5 min）
5. 冷PBS（4℃）洗滌2次
【關鍵步驟：低溫促進微管解聚，增強M期阻滯】
6. 37℃溫培養基洗滌1次
7. 重懸于新鮮完全培養基，37℃孵育
8. 每隔15-30 min取樣，流式檢測pHH3（M期標志）
9. 當M期細胞>80%時，即為同步化M期細胞
2. G0期誘導（血清饑餓法）
原理：剝奪生長因子使細胞退出周期進入G0期
1、取處于對數生長期的細胞；
2、用無血清的培養基培養24h，注：有時候完全去掉細胞發生死亡，因此可以嘗試用含1%-2%FBS的培養基培養細胞24-48h；
3、用胰蛋白酶消化細胞即可收獲G0期細胞
3. 雙胸苷阻斷法（Thymidine Double Block） — 最常用
Day 0: 接種細胞（30-40%密度）
Day 1: 第1次胸苷阻斷（2 mM，16 h）
↓ PBS洗3次，換新鮮培養基
Day 2: 釋放培養（9 h）
↓
第2次胸苷阻斷（2 mM，16 h）
↓ PBS洗3次
Day 3: 獲得同步化細胞（此時為G1/S邊界）
可每隔2 h取樣追蹤周期進程
懸浮細胞需重點關注以下哦:
一、細胞洗滌：
1. 細胞懸液轉移至離心管
2. 室溫或37℃，300×g，5 min離心
3. 棄上清，輕彈管底分散細胞團
4. 加入37℃預溫培養基/PBS，輕柔吹打重懸
5. 重復2-3次
二、防成團技巧：
- 使用硅化離心管
- 加入0.1-0.5 mM EDTA（不影響大多數細胞）
- 使用寬口吸頭，減少機械剪切