細胞加藥真的很讓人頭疼,加多了不要幾個小時,細胞就到了了無生機的地步,加少了根本沒辦法實現自己的理想的模型,藥物的有效性和安全性與細胞內藥物的濃度密切相關。因此,掌握細胞內藥物濃度的計算方法對于藥物研究至關重要。
1. 正常的我們都按照以下計算公式給細胞加藥:
細胞內藥物濃度 = 給藥濃度 × 細胞攝入率 × 細胞量 / 細胞體積

那么細胞給藥我們需要確定哪些呢,別急,聽我慢慢道來:
一、確定單體組分的化學性質,是親水的還是親脂性的;
常見的溶劑有水、醇、DMSO,丙酮,一般DMSO溶解的藥要稀釋1000倍才能用,因為這個濃度下才能剔除溶劑本身的毒性作用。以最大溶解濃度,稀釋1000倍作為最高濃度,然后依次稀釋。如果藥物有抑制作用,需采用改良寇氏法,算出一個IC50值,初步可以確定給藥的最大和最小劑量。
改良寇式法:lgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4)
Xm:lg 最大劑量
I:lg(最大劑量/相臨劑量)
P:陽性反應率之和
Pm:最大陽性反應率
Pn:最小陽性反應率
舉個例子:各組濃度0.1、0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001,稀釋倍數為10,最大濃度為0.1,抑制率為0.95、 0.80、0.65、0.43、0.21,0.06。代入
計算公式:
Pm=0.95
Pn=0.06
P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1
Xm=lg0.1=-1
lgI=lg0.1/0.01=1
lgIC50=-1-1*(3.1-(3-0.95-0.06)/4)=-3.6025
IC50=0.00025
二、藥物的添加方式
目前分為溶液添加和細胞膜添加兩種方式,第一種方式簡單,但可能會影響細胞的結構和功能,細胞膜添加的方式則更加有效地顯示藥物在細胞內的特定功能。
三、一定要考慮藥物的添加時間
藥物的添加時間應該足夠長,以便藥物有足夠的時間發揮作用,同時也應該考慮到實驗的穩定性,以避免細胞產生的變異,同時需要考慮給藥的次數,是一次性給藥還是分多次給藥,一次性給藥可以有效地影響細胞的表型,但其結果可能不太穩定;多次給藥可以穩定影響細胞的表型,但結果可能不太明顯。
