「DIFF+」抗流感
01前 言
從1918年到現在，人類與流感的斗爭經歷了100多年，根據世界衛生組織（WHO）發布的《2019~2030年全球流感策略報告》，在爆發性流行時，流感可在全世界迅速傳播，可影響總人口的10%～20%。即使在非爆發性流行的年份，全球每年季節性流感也會造成約300-500萬重癥病例和29-65萬死亡病例。
對抗流感病毒，我們需要依靠口服藥物與疫苗通力合作。目前，我國正處于流感流行期。據數據顯示，近三年來我國流感藥物銷售額在不斷上升，2023年上半年我國流感藥物銷售額約為36.82億元。流感病例每年仍在激增，預計將推動抗流感藥物市場的持續增長。流感疫苗是全球疫苗產業界的重磅品種，市場空間巨大，而國內流感疫苗滲透率低，與發達國家仍有巨大差距。截至 2020 年，國內流感疫苗批簽發總量 5765萬劑次，若按照2020 年末全國總人口 141212 萬人來計算，即便當年簽發的疫苗實現全部接種，全人群接種率也僅有 4.08%。
根據作用機制，抗流感病毒藥物主要分為神經氨酸酶抑制劑（奧司他韋、帕拉米韋、扎那米韋）、血凝素抑制劑（阿比多爾）和RNA聚合酶抑制劑（瑪巴洛沙韋、法維拉韋）三大類。
抗流感病毒藥物研發靶點及代表藥物
source: Mark von Itzstein, Nature Reviews Drug Discovery, 2007
抗病毒藥物研發面臨挑戰
目前常用抗流感藥物治療時間窗相對較窄，例如奧司他韋必須在流感病毒感染后48小時內開始服用才能達到最佳療效。這種時間限制對新藥的研發構成了挑戰：開發的新藥不僅需要在病毒復制高峰期快速有效地抑制病毒，還要能在病程中較晚階段顯示出療效，以覆蓋錯過初始治療窗口的患者。因此，研究者需要尋找或設計能夠在更寬治療窗口內有效并且安全的藥物，這增加了藥物開發的復雜性和成本。
同時，流感病毒易發生耐藥突變也給新藥研發帶來挑戰。奧司他韋和扎那米韋等神經氨酸酶抑制劑大規模使用或濫用引起的耐藥現象逐漸增多，核酸內切酶抑制劑巴洛沙韋在臨床III期實驗中病毒也迅速發生耐藥。目前針對流感病毒耐藥性，尚無有效的解決方法。
此外，現有上市藥物對流感重癥患者的治療效果相對有限。因此，急需研發新型抗流感病毒藥物來滿足臨床治療流感患者的迫切需求。
「DIFF+」抗流感
02
迪福潤絲生物抗病毒藥物臨床前評價平臺——篩選及藥效評價
迪福潤絲生物的臨床前CRO藥物研究平臺，涵蓋針對不同類型的流感病毒的體內外藥效評價?？蛇M行聚合酶活性檢測（Minigenome RNP），利用隨機突變病毒庫技術，可提前預測耐藥位點，為藥物研發指明方向。
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03迪福潤絲生物疫苗開發服務平臺——安全性、穩定性、有效性評價 & 毒株開發
迪福潤絲生物的流感疫苗開發服務，涵蓋針對不同類型的流感候選疫苗的體內外安全性評價、疫苗免疫原性及攻毒保護效率評價等一體化服務。
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04服務核心優勢
- Bio Database毒株資源優勢：
- Tech Database技術資源優勢: 迪福潤絲生物擁有成熟的反向遺傳操作技術平臺，擁有行業領先的技術優勢：
流感病毒報告病毒系統：
通過病毒反向遺傳操作技術，迪福潤絲將報告基因插入到流感病毒基因組中。這種先進的技術為研究人員提供了一種高效、直觀且可靠的工具。通過流感報告病毒，我們可以在體內外實驗中高效且直觀地觀察病毒的動態感染過程。通過檢測報告蛋白的表達水平定量分析病毒的復制情況，從而評價抗病毒藥物的效果。
聚合酶活性檢測（Minigenome RNP）：
通過聚合酶活性檢測，我們可以在實驗室中重建流感病毒的基因復制和轉錄過程，從而評估流感病毒聚合酶的活性和功能。在抗病毒藥物的篩選中發揮重要作用，研究人員可以利用這項技術評估不同抗病毒藥物對流感病毒聚合酶活性的影響，從而為藥物研發提供重要參考。
構建耐藥株 預測耐藥位點（隨機突變病毒庫技術）：
迪福潤絲生物擁有構建耐藥株和預測耐藥位點的先進技術——隨機突變病毒庫技術。這項技術的核心是通過引入隨機突變來生成大規模的病毒變異庫，然后利用篩選或測序等方法來識別具有耐藥性的突變體。通過隨機突變病毒庫技術，我們能夠生成大量的病毒變異體，從而有效地研究耐藥性的發生機制，并為抗病毒藥物的開發提供重要的參考和指導。
復制缺陷型流感病毒（Defective Interfering Influenza Virus Particles，DIIVPs）：
在研究高致病性禽流感病毒時，由于其高度致病性和傳播性，直接使用完整的病毒進行實驗可能存在安全風險，因此使用DIIVPs成為一種替代方法。迪福研發通過成熟反向遺傳平臺，通過缺失病毒致病基因構建缺陷型病毒，使得病毒在感染宿主細胞后無法完全復制，從而減輕了實驗操作中的風險。DIIVPs為研究高致病性禽流感病毒提供了一種安全有效的研究工具，可以用于評估疫苗和抗病毒藥物在細胞水平的有效性，為科學家在普通環境下進行流感病毒相關研究提供了可能。
VSV-流感假病毒（VSV-FLU）：
水泡性口炎病毒（Vesicular Stomatitis Virus，VSV）載體的流感假病毒是另一種用于研究流感病毒的工具。它是通過將VSV的囊膜蛋白替換為流感病毒的囊膜蛋白來構建的，從而使VSV變成了一種能夠攜帶流感病毒基因組的假病毒。通過結合使用VSV-FLU假病毒和DIIVPs假病毒，研究人員可以對高致病性禽流感的各個靶點進行全面評價。VSV載體的流感假病毒是一種安全且高效的工具，為開發新型疫苗和抗病毒藥物提供了重要支持。
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05案例分享
1. 報告病毒
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熒光報告病毒-細胞水平
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Diff構建的流感熒光報告病毒感染細胞后可以產生很強的熒光信號，說明病毒在細胞內可以正常復制和表達GFP；
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Diff構建的流感熒光報告病毒可以形成空斑，具有與WT病毒有相同功能。
報告病毒活體成像
利用MA-PR8-NanoLuc對抗病毒藥物進行體內評價
2. 小鼠適應株-藥效評價
目前小鼠已被廣泛用于研究發病機制、病毒復制、宿主免疫反應以及抗病毒藥物和疫苗的效力。感染非適應性人類流感病毒的小鼠一般不會出現典型的人類流感癥狀，如發熱和呼吸道癥狀(打噴嚏、流鼻涕、咳嗽等)；一些高致病性禽流感病毒可以在小鼠體內引起疾病，小鼠感染流感的臨床癥狀包括弓背、被毛凌亂、食欲不振、體重減輕、神經癥狀(后肢麻痹)和死亡。
參考文獻
1. von Itzstein, M. The war against influenza: discovery and development of sialidase inhibitors. Nat Rev Drug Discov 6, 967–974 (2007).
卓越的服務體驗
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