中和抗體檢測——RSV疫苗評價金標準

呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）是一種包膜單股負鏈RNA病毒， RSV可以引起全年齡段人群的呼吸道感染，是世界范圍內引起5歲以下兒童急性下呼吸道感染（ALRTI）最常見的病毒病原，是造成嬰幼兒病毒性呼吸道感染住院的首要因素。

目前對于RSV的防治手段主要是疫苗及抗體藥物，中和抗體檢測是鑒定疫苗有效性的黃金標準，測定RSV（呼吸道合胞病毒）中和抗體的方法有多種，主要有熒光斑點計數法（Focus-Forming Assay, FFA）、噬斑法（Plaque Assay）、細胞病變效應法（Cytopathic Effect, CPE）、和ELISA（酶聯免疫吸附試驗）等。

熒光斑點計數法-RSV中和抗體檢測的實驗結果案例（左上角為熒光數值）

快速準確的熒光斑點計數法

熒光斑點計數法（Focus-Forming Assay, FFA）相對于傳統的細胞病變效應（Cytopathic Effect, CPE）法、噬斑法（Plaque Assay）和其他方法具有以下一些優勢：

1. 靈敏度和特異性高

a. 更高的靈敏度

迪福潤絲生物的熒光斑點計數法通過DIFF-GFP熒光報告病毒檢測或標記病毒抗原的熒光抗體檢測，可以識別早期感染和低水平的病毒復制，無需等待病毒大量復制引起明顯的細胞病變。

b. 特異性強

熒光斑點計數法可以更準確地識別RSV病毒感染，不容易受到其他細胞變化的干擾。

2. 快速結果

熒光斑點計數法通常能夠在較短時間內獲得結果，因為它不依賴于觀察顯著的細胞病變。相比之下，其他檢測方法可能需要更長的時間來觀察到細胞病變，迪福潤絲生物的RSV中和抗體檢測24小時即可觀察熒光反應。

3. 定量準確

熒光斑點計數法可以通過計數熒光斑點的數量直接定量病毒感染的程度，不依賴主觀觀察和評分，定量精度較低從而更精確地測定中和抗體的效價。

綜合對比表格：

熒光斑點計數法在檢測RSV中和抗體時具有更高的靈敏度和特異性，能夠快速獲得準確的定量結果，并且適合自動化和高通量分析。這些優勢使其在許多情況下優于傳統的CPE法、噬斑法（Plaque Assay）和其他檢測方法，特別是在需要快速、準確和高通量檢測的科研和實際應用中。盡管初期設備和試劑成本準備上需要一定投入，但其在快速、準確和高效檢測方面的優勢，使其成為檢測RSV中和抗體的優選方法。

一天出結果！RSV中和抗體檢測服務流程

迪福潤絲生物自有的的CRO服務平臺「DIFF+」可針對RSV疫苗效果進行評價，提供基于熒光斑點計數法的RSV中和抗體檢測服務，該檢測方法能夠與傳統的PRNT檢測方法建立線性相關性，靈敏度高、檢測迅速（24h即可出結果），并且該實驗方法的特異性、重復性均能滿足中和實驗的要求，適用于高通量樣本的檢測。

RSV中和抗體檢測流程圖

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迪福潤絲生物建立了完善的生物資源庫（Bio Database）,可提供豐富的RSV毒株進行更加準確可靠的疫苗評價。檢測用毒株包括RSV A和RSV B兩種亞型共六種毒株（A2、Long、CH-18537、9320、ON1、BA9）。

RSV中和抗體檢測服務案例

基于上文所示的檢測流程，通過DIFF-GFP熒光報告病毒，迪福潤絲生物可進行RSV疫苗中和抗體檢測及抗病毒藥物篩選等服務，24小時可快速得到實驗結果。將待測樣本與RSV病毒共孵育后加入待感染細胞，CC孔為細胞對照，不加病毒，VC孔為病毒對照，只加病毒，檢測結果如圖所示。 

根據熒光斑點計數儀的斑點計數結果，半中和滴度NT₅₀使用GraphPad Prism軟件中的非線性回歸分析計算值。

毒株資源列表：

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