炎癥小體（Inflammasomes）作為一種多蛋白復合物，參與生理性和病理性炎癥反應，其激活機制的研究是當前免疫與疾病領域的核心方向。Adipogen針對炎癥小體研究需求，提供覆蓋炎癥小體關鍵成分的經KO驗證抗體。在炎癥小體研究中，免疫印跡法檢測caspase-1是檢測炎癥小體激活情況的金標準方法，但該方法也存在一定的技術難點，尤其在蛋白沉淀、蛋白分離和轉膜方案的選擇上。為助力您高效開展實驗，Adipogen建議您參考如下protocol與tips進行操作。

AG-20B-0042-C100：anti-Caspase-1 (p20) (mouse), mAb (Casper-1)

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請見 https://adipogen.com/ag-20b-0042-anti-caspase-1-p20-mouse-mab-casper-1.html

不同實驗類型參考方法

相關應用參考文獻官網

請見 https://adipogen.com/inflammasomes#6

Western Blot注意事項

請見 https://www.kdocs.cn/l/cudquPdvt7Zw

中文注意事項（僅供參考，如有與英文不符的地方，請以英文為準）：

• 啟動與激活：具體的啟動和激活步驟請按照廠家提供的protocol進行。

• 樣本準備：活化的caspase-1的p20/p10片段在細胞裂解后會被釋放至胞外，為了檢測上清液中的caspase-1片段，建議通過沉淀法對樣品進行濃縮，且不要使用含有胎牛血清的培養基，具體可見https://adipogen.com/media/wysiwyg/Protocols/Chapter_9.pdf。

• 電泳與轉膜：

- 建議使用MES-SDS緩沖液替代常用的MOPS-SDS緩沖液，因其更適用于小分子蛋白質；

- 避免預染蛋白Marker位置不準，pH 會改變部分預染蛋白Marker的遷移行為，預染Marker通常是在Tris-甘氨酸凝膠（pH=9.5）中校準過遷移速率，因此建議在電泳前確認Marker與所用緩沖液的兼容性，或使用未染色蛋白Marker以準確判斷目標蛋白分子量；

- 轉膜采用濕轉或半干轉；

- 轉膜緩沖液使用乙醇進行配制：若采用傳統間接膠片曝光法顯影，使用 96% 變性乙醇；若使用紅外成像系統法，使用無水乙醇。

AG-20B-0048-C100：anti-Caspase-1 (p20) (human), mAb (Bally-1)

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Western Blot注意事項

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中文注意事項（僅供參考，如有與英文不符的地方，請以英文為準）同產品AG-20B-0042-C100：anti-Caspase-1 (p20) (mouse), mAb (Casper-1)。

AG-20B-0014-C100：anti-NLRP3/NALP3, mAb (Cryo-2)

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Western Blot注意事項

請見 https://www.kdocs.cn/l/cebfdtmJjKct

中文注意事項（僅供參考，如有與英文不符的地方，請以英文為準）：

• 啟動與激活：NLRP3 的含量通常很低，需要保證組織或細胞中應含有足夠的 NLRP3，因此啟動和激活步驟對于成功進行實驗至關重要。具體的啟動和激活步驟請按照廠家提供的protocol進行。

• 電泳與轉膜：用抗體檢測到的主要條帶約在 110kDa 處。對于分子量大于 100kDa 的高分子量蛋白質，確保所有 NLRP3 都已轉移至關重要。

- SDS-PAGE濃度小于8%且每個泳道至少上樣20-30μg；

- 所有的緩沖液都應現配現用；

- 轉膜緩沖液中使用15-20%甲醇（PVDF除外）；

- 在轉膜之前，不要讓凝膠在轉膜緩沖液中放置很長時間；

- 轉膜在濕轉儀中進行，條件為 4℃、20V 電壓，過夜轉膜（轉膜時間不得短于1小時且不建議使用干轉儀或半干轉儀）。

AG-25B-0006-C100：anti-Asc, pAb (AL177)

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免疫熒光注意事項

請見 https://adipogen.com/media/wysiwyg/Protocols/Chapter_9_NLR.pdf

中文注意事項部分內容（僅供參考，如有與英文不符的地方，請以英文為準）：

- 由于炎癥小體活化導致細胞死亡，細胞經常與平板分離，若在孔板中進行IF實驗，細胞會在洗滌步驟中被沖走，留下很少的細胞用于成像。通過在板上預涂聚L -賴氨酸或小鼠IV型膠原蛋白，并用無菌注射用水清洗培養皿，使其完全干燥后再接種細胞。

- 固定步驟使用的甲醛溶液現配現用，隨著時間的推移，甲醛氧化成甲酸。

AG-20B-0010-C100：anti-ZBP1, mAb (Zippy-1)

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AG-20B-0020-C100：anti-Polyglutamylation Modification, mAb (GT335)

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抗體使用注意事項

請見 https://adipogen.com/ag-20b-0020-anti-polyglutamylation-modification-mab-gt335.html 
中文注意事項（僅供參考，如有與英文不符的地方，請以英文為準，英文請見上述鏈接“Other Product Data”）：

(1) 由于蛋白多聚谷氨酸化修飾尚無已知的共有修飾位點，因此該抗體檢測不具有序列特異性；但需注意，修飾位點需處于酸性環境中（該條件為檢測必要條件）。
(2) 抗體使用濃度過高，會在免疫熒光實驗中掩蓋其特異性。

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