考馬斯亮藍染色
1921年, Folin首創了測定可溶性蛋白質含量的方法Folin-酚試劑法。Folin-酚試劑法是基于蛋白質分子中酪氨酸和色氨酸殘基 (酚基) 與酚試劑 (磷鎢酸#磷鉬酸) 可發生藍色反應的原理；而藍色化合物的顏色深淺與蛋白質濃度呈正比。1951年, Lowry對Folin法進行了改進, 他發現在堿性溶液中, 蛋白質分子中的肽鍵可與堿性銅試劑中的Cu2+螯合, 形成蛋白質-銅復合物, 該復合物能夠與Folin酚試劑反應產生藍色化合物，這一改進大大提高了測定的靈敏度, 改進后的方法被稱為“Lowry法”。不過Lowry法仍存在測定范圍窄、使用試劑多、干擾物質多、耗費時間長、反應時間難以控制等缺點。1976年美國科學家Bradford用考馬斯亮藍G250與蛋白質結合的方法來定量測定蛋白質含量。考馬斯亮藍法是目前實驗室中最常見、靈敏度最高的一種測定蛋白質含量的方法。它將比色法和染料結合法相結合, 與其他傳統方法相比具有許多突出的優點, 被廣泛應用于各類生物材料的可溶性蛋白含量測定, 是生物化學、植物生理學、分子生物學、食品科學等實驗課程中的經典實驗項目之一。
考馬斯亮藍是一種陰離子染料， 常用考馬斯亮藍G250和R250。考馬斯亮藍 G250在游離狀態下呈紅色，當它與蛋白質通過疏水結合后變為藍色，蛋白質-色素結合物在595nm波長下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。考馬斯亮藍G250染色可以同時固定和染色，因此能立即觀察顯色結果，可用來確定電泳時間，觀察初步結果。考馬斯亮藍R250染色靈敏度比G250高得多，但對酸溶蛋白、醇溶蛋白不合適，因為在染色過程中，蛋白質會溶解在染色液或脫色液中。可用于SDS-PAGE 或非變性PAGE蛋白電泳的快速染色，或Western轉膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測。
1、試劑配制
（1）考馬斯亮藍染色液R250配方（100ml）考馬斯亮藍R250 | 0.25g |
甲醇 | 45ml |
乙酸CH?COOH | 10ml |
ddH2O | 45ml |
（2）考馬斯亮藍脫色液配方（1000ml）
甲醇 | 250ml |
乙酸CH?COOH | 80ml |
ddH20定容至1000ml | |
2、具體操作步驟
（1）電泳結束后，切取含有Maker蛋白和蛋白樣品的凝膠塊放入適量考馬斯亮藍染色液中，保證液體可以完全浸沒凝膠；（2）置于水平搖床或側擺搖床上緩慢晃動，室溫染色1h及以上（或置于微波爐等加熱裝備進行間隔加熱染色，每次3~5min，加熱3~4次）；
（3）回收染色液（染色液可重復利用2~3次）；
（4）加入適量考馬斯亮藍脫色液，確保脫色液完全覆蓋凝膠；
（5）置于水平搖床或側擺搖床上緩慢搖動，室溫脫色4~24h。期間更換脫色液2~4次，直至藍色背景基本脫去。通常蛋白條帶在脫色1~2小時后就可出現（也可以通過微波爐等加熱裝置間接加熱進行脫色，每次3~5min，加熱次數根據脫色效果而定）
（6）完成脫色后，用ddH2O浸泡，進行檢測和觀察。
QuickBlue快速染膠液
1、產品詳情
Biodragon的QuickBlue快速染膠液是綠色環保型凝膠染液，可對凝膠中的蛋白條帶進行染色，可替代常規的考馬斯亮藍染液。與常規考馬斯亮藍染色相比：
（1）無需凝膠固定和脫色，省時，簡單；
（2）不含有甲醇、乙酸等對身體有害，刺鼻的物質；
（3）無需在通風櫥中操作；
（4）可以完全代替常規的考馬斯亮藍染液。
2、使用方法
（1）取出電泳槽中的凝膠，放到染膠容器中；（2）加染液至覆蓋凝膠，在搖床上染色；
（3）將染出條帶的凝膠放水中保存即可。
注意：
（1）對于靈敏度要求不是極高的普通實驗室的染膠實驗，一般染色10-20分鐘（可以將100ng含量以上的蛋白染出條帶），低背景，無需脫色，直接觀察或者拍照；
（2）對于靈敏度要求極高的染膠實驗，一般可采用染色1-2小時（可以將10ng含量蛋白染出條帶），低背景，無需脫色，直接觀察或者拍照；
（3）一般染色2小時后，蛋白條帶基本不會再加深，而背景會繼續加深，所以一般建議染色不要超過2小時；
（4）如果對凝膠背景要求很高，可將蛋白膠在水中，然后放在搖床上2小時，期間換4次水，可快速脫去背景顏色，也可以在水中浸泡過夜后，可使凝膠背景變成完全透明狀態。
3、產品特性
（1）外觀：藍色液體（2）成份：為G-250考馬斯亮藍顏料，含有少量乙醇，磷酸
（3）保存：室溫避光保存
（4）穩定性：室溫可保存24個月
4、參考數據
圖1~5為不同濃度BSA凝膠電泳的QuickBlue快速染膠液染色效果圖圖1 ：染色20min 效果圖
圖2 ：染色1h效果圖
圖3：染色2h效果圖
圖4：凝膠在QuickBlue快速染膠液中浸泡過夜效果圖
圖5 ：為圖4中的凝膠在水中洗2h 后的效果圖
圖6：客戶反饋實驗圖
圖7：QuickBlue快速染膠液
貨號：BF06152
規格：500ml
價格：540 RMB
公司簡介
Biodragon是一家由留學歸國人員創辦的生命科學領域技術研發型企業，專業從事新型生化試劑的研發和銷售。公司理念是通過自主創新的品牌產品改變傳統實驗模式，使生命科學研究變得更輕松、更高效。公司成立八年多來推出了上萬種自主品牌產品，其中包括QuickAntibody?免疫佐劑、QuickShuttle?轉染試劑、QuickFreezing?細胞凍存液、QuickVerification?膠體金檢測卡、Hybridoma Feeder添加因子和Pan-HPV? HPV L1抗體等多種獨特的自主知識產權產品。秉承“專業、創新”的理念，公司將繼續在擅長專業領域做強做大，為客戶提供更多的創新產品和服務，力爭成為國際知名的品牌生化試劑公司。
公司主要產品有抗體制備全套產品、病毒包裝相關產品、2萬多種科研用抗原抗體、近300種病理級抗體、近3000余種病毒蛋白及病毒抗體，另有WB、IHC、ELISA、細胞培養相關試劑及諸多特色產品和特色技術服務。
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