
辣根中含有一種過氧化物酶,分子小,穩定好,活性高。在生物及醫學領域有大本領,下面我們來一探它的真面目吧。
HRP簡介
HRP中含有血紅素,能利用H2O2氧化許多有機及無機化合物,被發現廣泛分布于植物界,其中辣根(辣根是一種常年生香草,在世界大部分溫和地區都有種植)中含量非常高,故名辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)。HRP是由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結合而成的糖蛋白,糖含量18%。活性高,穩定,分子量小,純酶容易制備,所以常用于生物及醫學領域。
HRP由多個同工酶組成,分子量為40,000,等電點為PH3~9,酶催化的最適PH因供氫體不同而稍有差異,但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下飽和度硫酸銨溶液。HRP的輔基和酶蛋白最大吸收光譜分別為403nm和275nm,一般以OD403nm /OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的純度。高純度的酶RZ值應在3.0左右(最高可達3.4)。RZ值越小,非酶蛋白就越多。
根據RZ值,有以下這些用途:
1) RZ>3 活性 >250u/mg, 主要應用于免疫學,是高純度的過氧化酶。采用特殊色譜純化技術以除去會影響免疫學反應的同工酶B .
2) RZ>2 活性 >180u/mg ,主要應用于臨床化學,我們的客戶也有將這個規格的產品應用于免疫學研究的。此時,一個標準化的分析方法就變得尤為重要。
3) RZ>1 活性 >100u/mg,主要應用于血糖試紙和尿液分析試紙。
4) RZ>0.6 活性 >60u/mg ,主要應用于尿液分析試紙。
免疫學中的應用
HRP(辣根過氧化物酶)可催化ECL等化學發光試劑產生化學反應發光,或催化DAB,TMB等底物顯色。HRP標記可以直接用于免疫學實驗,省卻中間二抗步驟;在雙加心ELISA中也應用最為廣泛。
發光原理
(1)發光過程:在化學發光酶免疫分析(CLEIA)中,使用過氧化物酶標記抗體,進行免疫反應后,利用魯米諾作為發光底物,在過氧化物酶和起動發光試劑(NaOH和H2O2 )作用下魯米諾發光,酶免疫反應物中酶的濃度決定了化學發光的強度。
(2)常用底物:魯米諾(32氨基鄰苯二甲酰肼,luminol),或其衍生物如異魯米諾(42氨基鄰苯二甲酰肼),是一類重要的發光試劑。
(3)發光條件:魯米諾的氧化反應在堿性緩沖液中進行, 在過氧化物酶及活性氧[過氧化陰離子,單線態氧,羥自由基,過氧化氫]存在下,生成激發態中間體, 當其回到基態時發光,其波長為425nm。
(4)研究發展:傳統的化學發光體系(HRP- H2O2 -LUMINOL)為幾秒內瞬時閃光,存在發光強度低、不易測量等缺點。 后來,在發光系統中加入增強發光劑,以增強發光信號,并在較長的時間內保持穩定,便于重復測量,從而提高分析靈敏度和準確性。
產品推薦
博奧龍的HRP標記試劑盒采用改良的碘氧化法活化辣根過氧化物酶(HRP),經過氧化以后活化的HRP可以與待標記物的游離氨基結合,發生希夫堿反應(Schiff's Base Reaction)。本品適用于帶有游離氨基的物質的標記,比如:帶有游離氨基(伯胺)的小分子化合物,蛋白或抗體。

有效期12個月(HRP有效期12個月)
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