提前準備好KGM培養基（首次提取為了防止角化細胞分化，建議加2.5%的馬血清）
培養基是這樣的，套裝無血清組分不含動物來源蛋白，500ml一套，使用簡單方便。
提前預冷將沖洗組織的緩沖液配制好，我們的建議是50%MEM+50%HBSS+2%PSN配好后放4°冰箱里保存。
眼科剪，眼科鑷子， 冰浴提前消毒準備好，0.25%EDTA胰酶準備好
好了，啰嗦了這么多，現在開始了。先來看看我們的提取的細胞圖片吧：
使用KGM角化細胞培養基（啟達生物，貨號：P8001)提取的人皮膚角質細胞7天的細胞生長圖
怎么樣看完圖片心動了嗎？
那么我們就開始提取的步驟吧！
表皮角質細胞的分離步驟主要包括以下幾步：
1.取厚1.5mm的皮片，（不超過12個小時為佳）用4℃MEM和HBSS混合液沖洗獲取的皮膚材料2-3次。冰浴的培養皿里操作，第一次沖去血跡,第二次刮去黏附的其他組織，就留下真皮層和表皮層，在沖洗一次后將組織移入新的培養皿中
2. 將皮膚展平，用手術刀切成2-3mm²的小片，放入中性蛋白酶消化液中，4℃下消化15-20h，或37℃下消化2-4h。
3.用無菌針頭和眼科鑷子分離真皮與表皮。表皮薄而透明，真皮厚且輕微腫脹并且在胰酶的消化下呈凝膠狀。
4.將分離出的表皮塊用0.25%胰蛋白酶，在37℃下振蕩消化10-30min后，直到表皮組織成絮狀后，加入含10%胎牛血清的培養基終止消化。
完成以上步驟后，你已經看到成功分離出表皮角質細胞的曙光了。但是一定要注意，整個過程需要精細的操作和嚴格的無菌環境，以確保細胞的完整性和活性。
5.用吸管輕輕吹打表皮組織，使細胞從組織塊上脫落下來，然后使用100um細胞濾網過濾并將細胞懸液轉移到離心管中。
6.在離心管中加入適量KGM角化細胞培養基，然后1000rpm離心5-7分鐘，以去除消化液和雜質。
7.棄去上清液，加入新的KGM培養基，輕輕吹打細胞，使其均勻懸浮。48小時后觀察細胞貼壁情況(第一次鋪板的時候建議加2.5%HS）
8.將細胞懸液接種到適當的培養器皿（如培養皿、培養瓶或培養板）中，加入足量的培養基，并放入細胞培養箱中進行培養。
9.在細胞培養過程中，需要定期更換培養基，以保持細胞的生長環境。同時，也需要觀察細胞的生長情況，并根據需要調整細胞密度和傳代。
以上步驟完成后，你就可以得到分離純化的表皮角質細胞，用于后續的實驗研究。請注意，實驗過程中需要嚴格遵守無菌操作規范，以避免細胞污染和實驗失敗。同時，也需要根據實驗需要選擇合適的培養基和條件，以確保細胞的正常生長和分化,比如角化細胞就使用我們的KGM角化細胞培養基，內皮細胞就使用我們的ECGM內皮細胞培養基.....
在細胞培養過程中，我們需要定期觀察細胞的生長狀態（一般建議兩天觀察一次或者一天一次）。健康的角質細胞應該呈現出貼壁生長、形態規則、細胞邊界清晰等特征。如果發現細胞出現生長緩慢、形態異常、污染等情況，需要及時采取措施，如更換新的培養基、調整培養條件、傳代或重新分離細胞.
怎么樣你學會了嗎？