登革熱疫情突襲！暫無針對登革熱的抗病毒特效藥

美洲地區2024年報告的登革熱病例數是去年同期的3倍。據巴西衛生部的數據顯示，2024年巴西登革熱疑似及確診病例已超410萬，死亡1937人。9月18日，廣東省疾病預防控制局公布2024年8月全省法定傳染病疫情概況，全省共報告登革熱1220例，較7月（233例）增長987例。今年5月起，廣東部分地區已陸續報告登革熱本地病例。

2024年以來，全球登革熱疫情形勢嚴峻，流行強度顯著超過歷年同期水平，東南亞、美洲國家登革熱疫情不斷攀高。登革病毒的傳播，已經成為熱帶、亞熱帶地區嚴重的公共衛生問題和重大疾病負擔。登革熱的發病具有季節性，一般在每年的5～11月份，高峰在7～9月份，人群普遍易感（圖1）。

圖1.登革熱癥狀圖示

登革熱是由登革病毒（dengue virus,DENV）引起的急性傳染病，主要通過埃及伊蚊或白紋伊蚊叮咬傳播。登革熱病毒是黃病毒科的一員，黃病毒屬（Flavivirus）是一大群具有包膜的單正鏈RNA病毒。目前，沒有針對登革熱的特效抗病毒治療藥物。DENV依抗原性不同分為1、2、3、4四個血清型，其中2型傳播最廣泛。登革病毒基因組由大約11kb的RNA組成。這種RNA編碼形成病毒體成分的3種結構蛋白(C、prM和E)和7種參與病毒RNA復制的非結構蛋白(NS1、NS2A/B、NS3、NS4A/B、NS5)。理想的藥物需要對所有血清型登革病毒都有效，而登革熱的癥狀與其他由蚊子傳播的寨卡病毒和基孔肯雅病毒相似，所以理想的新藥開發還要求能有一種對所有蚊媒病毒都有效的廣譜抗病毒藥物，以便在感染早期階段得以使用。

針對登革病毒的新藥研發，迪福潤絲生物可提供真病毒的中和抗體檢測與針對蛋白酶靶點的藥物篩選與評價的聯合開發，為提供更有效的抗病毒化合物發現做出力所能及的貢獻。

登革真病毒中和抗體檢測

迪福潤絲生物提供基于熒光斑點計數法的中和抗體檢測服務（圖2），該檢測方法靈敏度高、檢測迅速，并且該實驗方法的特異性、重復性均能滿足中和實驗的要求，適用于高通量樣本的檢測。

圖2. 登革真病毒中和抗體檢測流程圖

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服務內容

針對登革病毒的蛋白酶抑制劑篩選

新型登革熱病毒蛋白酶抑制劑的發現對于抗登革熱藥物研發至關重要，在大量化合物中尋找DENV蛋白酶抑制劑的過程中，行業急需一種可實現無需活病毒參與的細胞水平的正向篩選方式。由迪福潤絲生物獨家開發的蛋白酶抑制劑篩選系統，可在細胞水平直接模擬病毒自然感染過程，杜絕漏篩和假陽性等情況，可在新藥發現階段快速篩選大量化合物。

1）最簡便

肉眼觀測

DIFF蛋白酶抑制劑篩選系統可通過肉眼直接觀察藥物反應的熒光變化（圖3），進行定性判斷。

圖3. 以新冠陽性藥物GC376為例，添加不同濃度新冠3CL蛋白酶抑制劑后，

24h,48h,72h細胞GFP表達情況如上圖所示

2）最準確

原理可靠

本系統基于特制質粒的共表達機制，以新冠病毒為例，結合重組綠色熒光蛋白（rGFP）和冠狀病毒3CL蛋白酶。在該系統中，rGFP序列中嵌入了3CL蛋白酶的特異性切割位點。當3CL蛋白酶功能正常時，會特異性裂解rGFP，導致其熒光功能喪失，熒光強度減弱。相反，當抑制劑有效抑制了3CL蛋白酶的活性時，rGFP無法被切割，維持其完整性并正常發出熒光，熒光強度增強（圖4）。藥物有效性與熒光強度成正相關，是一種更直觀的正向篩選方式。

圖4. DIFF蛋白酶抑制劑篩選系統原理圖

結果準確

系統實驗結果與真病毒檢測結果高度一致（圖5）。

圖5. 使用活病毒進行檢測，GC376的IC50值為4.69μM；而采用DIFF篩選系統，IC50值為6.44μM，兩種方法測得的IC50值高度相近。

圖6. 添加不同濃度新冠蛋白酶抑制劑72h后熒光檢測值

3）可進行高通量篩選

系統檢測的熒光值低而信噪比好，可聯合現有藥物庫，一周迪福即可篩選1萬-10萬個登革熱藥物候選化合物，快速鎖定有效藥物（圖7）。

圖7. 高通量篩選操作示意圖