TransIT-X2? DYNAMIC DELIVERY SYSTEM

高效 — — 完美的廣譜轉染試劑

實用性廣 — — 可以適合用于DNA質粒，siRNA/miRNA以及RNP復合物

科技 — — 非脂質體，陽離子聚合物遞送

Mirus X2轉染系統通過創新的聚合物體系有效地將DNA和RNA從核內體遞送到細胞質中，克服了核酸遞送的關鍵障礙。

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圖1.TransIT-X2? Dynamic Delivery System可在多種細胞類型中實現較高水平的基因表達

TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）和Lipofectamine?2000轉染試劑（Thermo Fisher Scientific）試劑與DNA 3:1將編碼熒光素酶的質粒DNA轉染到41種不同的細胞類型中。使用標準熒光素酶測定法比較轉染后24小時的熒光素素酶的表達。在優化比例下實驗結果比較表明，使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）在41種細胞類型中的36種細胞中的熒光素酶表達優于或者等于競爭品牌；在17種細胞中TransIT-X2? Dynamic Delivery System是Lipofectamine?2000表達水平的2倍，具體細胞在圖中用?表示。

圖2. 使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System細胞中GFP表達水平較高

TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）將編碼EGFP的質粒DNA轉染到A549、CHO-K1、HepG2、LNCaP、MDCK、PC-12、原代人乳腺上皮細胞（HMEC）和原代正常人真皮成纖維細胞（NHDF）。使用4-8μl TransIT-X2?（MirusBio）遞送2μg DNA。使用Zeiss Axiovert S100在轉染后48小時拍照（32X）倒置熒光顯微鏡 *代表原代細胞。

圖3.使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System在多個細胞系和原代細胞中的GFP轉染效率較高

使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）將編碼EGFP的質粒DNA轉染到A549、CHO-K1、Hep G2、MDCK、LNCaP、PC-12、原代人乳腺上皮細胞（HMEC）和原代正常人真皮成纖維細胞（NHDF）中。使用0.2-0.4μl TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）在96孔板中進行轉染，以遞送0.1μg DNA（轉染試劑：DNA的比率2:1、3:1或4:1）。轉染48小時后，用guava? easyCyte? 5HT流式細胞儀（MilliporeSigma）對三個孔進行分析。 *代表原代細胞。

圖4. 使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System轉染質粒DNA和siRNA

使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）將Cy?5標記的編碼核YFP質粒DNA和Cy?3標記的siRNA轉染到HeLa細胞。使用4μL TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）在6孔板中用聚-L-賴氨酸（PLL）涂層的蓋玻片進行轉染，以遞送2μg DNA（2:1試劑：DNA比）和25 nM siRNA。使用Alexa Fluor?350 Phalloidin（Thermo Fisher Scientific）對肌動蛋白細胞骨架進行染色。在轉染后24小時使用Nikon A1R共焦顯微鏡拍攝圖像（63X）。圖像：黃色（核YFP）、藍色（Cy?5標記的DNA）、紅色（Cy?3標記的siRNA）、綠色（肌動蛋白細胞骨架）。

圖5. TransIT-X2? Dynamic Delivery System比Lipofectamine?2000具有更高的敲除率

TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）和Lipofectamine?2000轉染試劑（Thermo Fisher Scientific）用于轉染靶向內源性蛋白GAPDH和aha1的siRNA，或在原代正常人真皮成纖維細胞（NHDF）中遞送非靶向對照。根據說明書，使用4μl TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）或6μl Lipofectamine?2000（Thermo Fisher Scientific）和25nM siRNA在6孔板中轉染細胞。使用qRT-PCR測定GAPDH或aha1mRNA相對于18S rRNA水平的量，然后在轉染后48