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TransIT-X2? DYNAMIC DELIVERY SYSTEM

高效 — — 完美的廣譜轉(zhuǎn)染試劑

實(shí)用性廣 — — 可以適合用于DNA質(zhì)粒，siRNA/miRNA以及RNP復(fù)合物

科技 — — 非脂質(zhì)體，陽(yáng)離子聚合物遞送

Mirus X2轉(zhuǎn)染系統(tǒng)通過創(chuàng)新的聚合物體系有效地將DNA和RNA從核內(nèi)體遞送到細(xì)胞質(zhì)中，克服了核酸遞送的關(guān)鍵障礙。

如需購(gòu)買Mirus轉(zhuǎn)染試劑，請(qǐng)聯(lián)系Mirus授權(quán)全國(guó)代理欣博盛生物。

圖1.TransIT-X2? Dynamic Delivery System可在多種細(xì)胞類型中實(shí)現(xiàn)較高水平的基因表達(dá)

TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）和Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染試劑（Thermo Fisher Scientific）試劑與DNA 3:1將編碼熒光素酶的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到41種不同的細(xì)胞類型中。使用標(biāo)準(zhǔn)熒光素酶測(cè)定法比較轉(zhuǎn)染后24小時(shí)的熒光素素酶的表達(dá)。在優(yōu)化比例下實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較表明，使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）在41種細(xì)胞類型中的36種細(xì)胞中的熒光素酶表達(dá)優(yōu)于或者等于競(jìng)爭(zhēng)品牌；在17種細(xì)胞中TransIT-X2? Dynamic Delivery System是Lipofectamine?2000表達(dá)水平的2倍，具體細(xì)胞在圖中用?表示。

圖2. 使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System細(xì)胞中GFP表達(dá)水平較高

TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）將編碼EGFP的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到A549、CHO-K1、HepG2、LNCaP、MDCK、PC-12、原代人乳腺上皮細(xì)胞（HMEC）和原代正常人真皮成纖維細(xì)胞（NHDF）。使用4-8μl TransIT-X2?（MirusBio）遞送2μg DNA。使用Zeiss Axiovert S100在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)拍照（32X）倒置熒光顯微鏡 *代表原代細(xì)胞。

圖3.使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System在多個(gè)細(xì)胞系和原代細(xì)胞中的GFP轉(zhuǎn)染效率較高

使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）將編碼EGFP的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到A549、CHO-K1、Hep G2、MDCK、LNCaP、PC-12、原代人乳腺上皮細(xì)胞（HMEC）和原代正常人真皮成纖維細(xì)胞（NHDF）中。使用0.2-0.4μl TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）在96孔板中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，以遞送0.1μg DNA（轉(zhuǎn)染試劑：DNA的比率2:1、3:1或4:1）。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，用guava? easyCyte? 5HT流式細(xì)胞儀（MilliporeSigma）對(duì)三個(gè)孔進(jìn)行分析。 *代表原代細(xì)胞。

圖4. 使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA和siRNA

使用TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）將Cy?5標(biāo)記的編碼核YFP質(zhì)粒DNA和Cy?3標(biāo)記的siRNA轉(zhuǎn)染到HeLa細(xì)胞。使用4μL TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）在6孔板中用聚-L-賴氨酸（PLL）涂層的蓋玻片進(jìn)行轉(zhuǎn)染，以遞送2μg DNA（2:1試劑：DNA比）和25 nM siRNA。使用Alexa Fluor?350 Phalloidin（Thermo Fisher Scientific）對(duì)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架進(jìn)行染色。在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)使用Nikon A1R共焦顯微鏡拍攝圖像（63X）。圖像：黃色（核YFP）、藍(lán)色（Cy?5標(biāo)記的DNA）、紅色（Cy?3標(biāo)記的siRNA）、綠色（肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架）。

圖5. TransIT-X2? Dynamic Delivery System比Lipofectamine?2000具有更高的敲除率

TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）和Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染試劑（Thermo Fisher Scientific）用于轉(zhuǎn)染靶向內(nèi)源性蛋白GAPDH和aha1的siRNA，或在原代正常人真皮成纖維細(xì)胞（NHDF）中遞送非靶向?qū)φ铡８鶕?jù)說明書，使用4μl TransIT-X2? Dynamic Delivery System（Mirus Bio）或6μl Lipofectamine?2000（Thermo Fisher Scientific）和25nM siRNA在6孔板中轉(zhuǎn)染細(xì)胞。使用qRT-PCR測(cè)定GAPDH或aha1mRNA相對(duì)于18S rRNA水平的量，然后在轉(zhuǎn)染后48