??? 免疫組織化學、免疫細胞化學和免疫熒光是生物學中經常用到的三種應用,他們的英文名分別是Immunohistochemistry (IHC),Immunocytochemistry (ICC) 和Immunofluorescence (IF)。對于實驗室新手來說可能是很容易搞混的,即便是技術大拿們可能在寫英文文獻的時候也會不小心用錯,因為這三個應用確實有些相似,那么下面就隨小編一起來看一下他們到底區別在哪里吧。
詞根意義:
Immuno-指的是免疫技術 (例如,抗體和抗原的結合)
Histo-指的是組織(細胞以及它周圍的細胞外基質)
Cyto-指的是細胞(不包含細胞外的基質)
Chemistry-在這里指的是化學檢測方法(例如,顏色的變化)
Fluorescence-對被激發的熒光團的檢測
????? 對于這三個應用,有一個部分大家肯定不會搞混的就是“免疫-”,因為這三個應用都涉及到使用抗體,問題出在當你使用熒光劑來標記一抗或者使用熒光標記二抗的時候。IHC和ICC應用用中文來看很好區分,一個應用的樣本類型是組織(IHC),另一個樣本類型是細胞(ICC),可是一旦使用了熒光標記,大家似乎就有點不知道該用哪個了,因為免疫熒光指的就是使用了熒光標記,這時就很容易只寫一個IF,而不去寫明到底是組織(IHC)還是細胞(ICC)。這也是為什么小編個人不太喜歡用免疫熒光(IF)來作為一個應用命名的原因,因為免疫熒光不能提供給你足夠的信息,只是告訴讀者你用了熒光劑,可是這個一抗到底是用在組織上的還是細胞上的呢?所以小編認為,應用了熒光劑的IHC和ICC應該更名為IHF和ICF分別意為Immunohistofluorescence(免疫組織熒光)和Immunocytofluorescence(免疫細胞熒光),雖然這兩個詞匯在英文文獻中應用的還不是很廣泛,但絕對不是小編自己杜撰的哦,已經有些學者在使用了,規范化應該也只是時間的問題,現在來看幾幅圖片更好的區分他們吧!
先不看答案,你能看出這些分別是什么應用嗎?
A. IHC (免疫組織化學) 使用小鼠抗HCN1單克隆抗體 (SMC-304) 對小鼠小腦的免疫組化分析. 固定: 室溫下10% 福爾馬林溶液處理 12-24小時. 一抗: 小鼠抗HCN1單克隆抗體, 1:1000, 室溫下孵育1小時. 二抗: HRP/DAB 檢測系統:生物素偶聯的山羊抗小鼠, 鏈霉親和素過氧化物酶, DAB 色原 (棕色), 室溫下孵育30分鐘. 復染色: Mayer氏蘇木素 (紫色/藍色) 細胞核染色, 250-500uL, 室溫下5分鐘.
B. ICC(免疫細胞化學)使用小鼠抗Hsp70單克隆抗體 (SMC-100) 對小鼠熱休克的黑素瘤細胞的免疫細胞化學分析. 固定: 福爾馬林. 一抗: 小鼠抗Hsp70單克隆抗體, 1:1000, 室溫下隔夜孵育. 二抗: Biotin 山羊抗小鼠. 圖片來自: Dr. Ewa Malusecka, Maria Sklodowska-Curie Memorial Cancer Ceter and Inst. Of Oncology, Poland.
C. IHF (免疫組織熒光) 使用小鼠抗Neuroligin 4單克隆抗體 (SMC-469) 對小鼠齒狀回的免疫組織熒光分析. 固定: 甲醛固定石蠟包埋. 一抗: 小鼠抗Neuroligin 4單克隆抗體, 1:100. 二抗: FITC 山羊抗小鼠 (綠色). 復染色: DAPI (藍色) 細胞核染色, 1:1000. 圖片來自: Rachel Reith, NIH/NIMH.
D. ICF (免疫細胞熒光) 使用小鼠抗HO-1單克隆抗體 (SMC-131) 對人HeLa Cells的免疫細胞熒光分析. 固定: 室溫下2% 甲醛處理20分鐘. 一抗: 小鼠抗HO-1單克隆抗體, 1:100, 4℃下孵育12小時. 二抗: FITC 山羊抗小鼠 (




