在7月初出版的Journalof Translational Medicine雜志（2020年影響因子5.531）刊登了首都醫科大學附屬北京胸科醫院聯合廣州市胸科醫院、湖南省胸科醫院和新疆維吾爾自治區胸科醫院共同開展的一項前瞻性多中心診斷研究成果，該研究為活動性結核病的精準診斷提供了全新的思路與方法。
研究背景
結核病一直是全球特別是發展中國家的主要死因之一。WHO 推薦的結核病分子診斷方法在培養陽性結核患者中有較好的效果，但它們的靈敏度難以涵蓋到培養陰性結核病例。IFN-γ釋放試驗雖然可以用做結核感染診斷，但無法區分活動性結核和結核潛伏感染。在結核病高負擔國家，如何準確診斷活動性結核病，特別是實現菌陰結核的實驗室診斷，是控制結核病傳播和終止結核的難點。在國家十三五傳染病防治科技重大專項支持下，該團隊使用結核特異性細胞因子IFN-γ和IL-2 聯合檢測技術對上述問題給出了新的解決方案。
研究方法
該項研究在2017年7月至2018年12月期間連續納入了3245例疑似結核患者，最終，2536例被診斷為活動性肺結核和718例非結核病例，其中活動性肺結核病例有1092例為結核病確診病例，1444例為臨床診斷病例(詳見Table 1)。對患者同時采取痰液樣本和血液樣本，針對每位受試者采集外周血單個核細胞經結核特異性蛋白ESAT-6–CFP-10-Rv1985c刺激后，分析其IFN-γ和IL-2的釋放水平，建立活動性結核預測模型。
研究結果
①新的檢測靶標IL-2特異性高達94.3%
研究結果發現IFN-γ的ROC 曲線下面積為0.859，而IL-2 的ROC 曲線面積0.865（詳見Fig. 2 ） ，IFN-γ的總體敏感性和特異性分別為83.8% 和81.5%，IL-2的特異性為94.3%，靈敏度為72.6%（詳見Table2）。
②新的檢測靶標IL-2提高結核病的檢出率
雙因子檢測的敏感性為87.9%，單因子檢測敏感性為83.8%，敏感性的增加主要是由于引入新的檢測靶標IL-2，表明約16%的活動性結核患者中IFN-γ結果為陰性，而這些患者中有1/4的病例IL-2 結果為陽性。當IFN-γ和IL-2 串聯組合時，特異性進一步提高到96.0%，可與分子診斷的培養陽性檢測結果相媲美，甚至可以對培養陰性的患者產生可靠的結果。
③并聯檢測敏感性高達87.9%，串聯檢測特異性高達96.0%
進一步分析IFN-γ和IL-2聯合應用對活動性結核病的診斷價值。對IFN-γ和IL-2 進行并聯檢測時，敏感性升至最高的87.9%，特異性達到79.8%，陽性預測值達93.9%；當IFN-γ和IL-2 進行串聯檢測時，718 例非結核患者中有689 例檢測結果為陰性，特異性為96.0%，敏感性為68.5%，陽性預測值為98.4%。值得注意的是，串聯檢測在結核病確診患者的敏感性（72.1%），高于臨床診斷敏感性（65.8%），提示IFN-γ和IL-2串聯檢測的準確度與結核病的嚴重程度相關。
④雙因子聯合檢測靈活性高，滿足不同的檢測場景
研究團隊根據活動性結核病不同流行模型，分別闡述了IFN-γ和IL-2聯合檢測在不同模型中診斷價值，并提出了適用于綜合性醫院和專科醫院各自的診斷算法。
在綜合性醫院中，約有10%的結核疑似患者最終確診為活動性結核，與常規涂片鏡檢相比，使用具有更高敏感性的雙因子并聯檢測可幫助臨床醫生發現更多活動性結核病患者（如圖B）；在結核病專科醫院，結核病疑似患者中活動性結核病的比例達到50%，使用具有高特異性的雙因子串聯檢測可為活動性結核病患者特別是菌陰結核患者提供診斷依據（如圖A）。
根據在不同醫院中結核病患者不同的比例，采用IFN-γ/IL-2并聯和串聯檢測進行預測
迪澳生物DeFine.TB
結核分枝桿菌特異性細胞因子（IFN-γ和IL-2）檢測試劑是“十三五”國家科技重大專項傳染病防治專項成果轉化產品，目前國內已獲批上市。該試劑盒的檢測原理與文章所用技術一致，選取了存在于結核分枝桿菌，但在卡介苗和大多數非結核分枝桿菌中普遍缺失的RD1區和RD2區編碼的ESAT-6、CFP-10、Rv1985c蛋白，應用基因工程技術將其表達成為融合蛋白（ESAT-6-CFP-10-Rv1985c）。
在檢測時，將人外周血單個核細胞從全血樣本中分離出來 ，消除血液本底干擾因素，通過計數單個核細胞數量，排除人群中免疫細胞數量的個體差異影響。將定量的單個核細胞與融合蛋白ESAT-6-CFP-10-Rv1985c在細胞培養板上共培養，結核特異性 T 細胞由于記憶反應而分泌γ-干擾素及白細胞介素-2因子，再利用雙抗體夾心酶聯免疫法，檢測培養上清中的γ-干擾素、白細胞介素-2的濃度，來判斷其是否存在結核分枝桿菌特異性的細胞免疫反應。用于結核病的輔助診斷，能夠及時發現活動性結核患者，同時對于潛伏感染患者能夠進行及時、準確的排篩。
“雙因子”檢測臨床應用的價值：
· 發現更多的活動性結核患者
· 病原學陰性結核病的輔助診斷
· 用于免疫抑制劑用藥前結核感染的排查
· 健康及高危人群結核病的篩查
· 肺外結核病的輔助診斷
· 非結核病的鑒別診斷
· 治療過程中結核病活化狀態風險預測