1.1. 試劑配制

• 凝膠濃度精準匹配：蛋白電泳需根據目標分子量調整分離膠濃度（小分子蛋白選 12%-15%，大分子選 8%-10%），核酸電泳則按片段長度選瓊脂糖濃度（100-500bp 用1.5%-2%，1-10kb 用 0.8%-1%），濃度偏高會導致條帶拖尾，偏低易使條帶擴散。

 萬生昊天GSG系列蛋白預制膠遷移率圖譜

• 緩沖液現配現用：Tris-甘氨酸緩沖液（蛋白）、TAE/TBE 緩沖液（核酸）需新鮮配制，避免反復凍融導致離子強度變化；核酸電泳緩沖液可加入終濃度 0.5 μg/mL 的 EB 或無毒染料，無需額外染色步驟。

• 樣品處理避坑：蛋白樣品需加入 loading buffer 后 95℃加熱 5-10 分鐘變性，冷卻后離心再上樣（防止樣品飄出加樣孔）；核酸樣品避免反復凍融，可加入 RNA 酶抑制劑防止降解，上樣前用 ddH2O 調整濃度至統一梯度。

1.2. 器材檢查

• 電泳槽清洗：用去離子水沖洗電極和槽體，去除殘留凝膠或緩沖液結晶，避免短路或條帶扭曲；

• 凝膠板密封：組裝模具時確保密封條緊密貼合，倒入凝膠前先加少量分離膠測試是否漏液，漏液需重新調整模具；

• 電源校準：確認電源正負極連接正確（蛋白電泳上樣孔側為負極，核酸電泳同理），提前設置好電壓參數（恒壓模式更穩定）。

2.1. 凝膠制備與凝固

• 分離膠與濃縮膠比例：蛋白電泳濃縮膠濃度固定為 4%，高度約 1cm（幫助樣品聚焦），分離膠高度根據樣品量調整（一般占凝膠板 2/3）；

• 凝膠凝固技巧：倒入凝膠后立即在表面覆蓋一層無水乙醇或異丙醇，隔絕空氣加速凝固，同時避免膠面出現凹陷，凝固時間至少 30 分鐘（室溫較低時可放入 37℃恒溫箱縮短時間）。

2.2. 上樣與電泳參數

• 上樣量控制：蛋白電泳每孔上樣量 5-20 μg，核酸電泳每孔 10-50 ng，避免上樣過多導致條帶重疊，過少則無法顯色；上樣時槍頭需插入加樣孔底部緩慢推注，避免產生氣泡。

• 電壓設置：蛋白電泳濃縮膠階段用 80V，待溴酚藍進入分離膠后調至 120-150V；核酸電泳恒壓 5-10 V/cm（凝膠長度），小分子片段用較高電壓（縮短電泳時間），大分子用較低電壓（保證分離效果）。

• 電泳終止時機：蛋白電泳待溴酚藍到達凝膠底部 1cm 處停止，核酸電泳根據 Marker 遷移位置判斷（目標條帶與 Marker 對應位置一致時終止），避免過度電泳導致條帶跑出凝膠。

2.3. 染色與顯影優化

• 蛋白染色：考馬斯亮藍染色需用染色液加熱至95℃后，搖床脫色 0.5-1小時；脫色液加熱至95℃后，搖床脫色 0.5-1小時，根據脫色效果，可重復更換 1-2 次脫色液，可加入少量甘油防止凝膠干裂；銀染法靈敏度更高，適合低豐度蛋白，但需嚴格控制染色和顯影時間（避免背景過深）。

• 核酸顯影：EB 染色后用紫外凝膠成像儀觀察，曝光時間控制在 10-30 秒（避免過度曝光導致條帶模糊）；無毒染料（如 GoldView）可在電泳過程中實時觀察，無需額外染色步驟，更安全高效。

• “新鮮” 是基礎：試劑、樣品盡量現配現用，避免長時間存放導致性能下降；

• “匹配” 是關鍵：凝膠濃度、電壓、上樣量需根據目標分子大小精準匹配，不可一概而論；

• “耐心” 是保障：凝膠凝固、脫色、顯影等步驟需足夠時間，避免急于求成導致實驗失敗。