進入十月以來，不少父母反映自家孩子感染了呼吸道合胞病毒（RSV），甚至有患兒因病情嚴重被送入ICU。據(jù)某市兒童醫(yī)院透露，近期因發(fā)熱、咳嗽、哮喘等呼吸道癥狀前來急診的兒童數(shù)量，較9月底上升約30%。在呼吸科住院患兒中，呼吸道合胞病毒肺炎的檢出率居首位，其中最小的患者僅為1個多月大。為何RSV病毒對嬰幼兒威脅如此之大？
信息來源：新晚報
RSV威脅：嬰幼兒與老人的高危挑戰(zhàn)
呼吸道合胞病毒（RSV）傳染性強，主要經(jīng)飛沫和接觸傳播，冬季早春高發(fā)，潛伏期2–8天。嬰幼兒、老人及免疫功能低下者為高危人群，尤其6個月以下嬰兒感染易致嚴重肺炎。臨床表現(xiàn)差異大：嬰兒可表現(xiàn)為呼吸暫停、肺部啰音；成人多呈上感癥狀，老年人可能發(fā)展為氣管炎或肺炎。RSV之所以能引發(fā)如此嚴重的健康威脅，與其獨特的病毒學結(jié)構(gòu)密不可分。?
RSV病毒結(jié)構(gòu)
呼吸道合胞病毒（RSV）的基因組全長為15.2 kb（圖1），包含10個基因，共編碼11種蛋白。值得注意的是，其M2基因含有兩個重疊的開放閱讀框（ORF），可分別表達M2-1和M2-2蛋白。其中M2-1蛋白對病毒轉(zhuǎn)錄過程至關(guān)重要，而M2-2蛋白則調(diào)控病毒從轉(zhuǎn)錄階段向基因組復制階段的轉(zhuǎn)換。RSV基因組的初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和NS2，這兩種蛋白通過協(xié)同作用抑制細胞凋亡和干擾素應答。基于該病毒的結(jié)構(gòu)特征，目前RSV的藥物以及疫苗研發(fā)也取得了很大進展。
圖1.呼吸道合胞病毒（RSV）的基因組結(jié)構(gòu)與蛋白結(jié)構(gòu)。（A）RSV基因組結(jié)構(gòu)。
（B）RSV蛋白結(jié)構(gòu)。
RSV目前藥物研發(fā)進展:
在過去二十年中，隨著對呼吸道合胞病毒（RSV）發(fā)病機制與免疫病理學認識的深化，研究者在RSV的治療以及預防策略上取得了重要突破。
1) RSV的藥物治療
盡管RSV帶來的疾病負擔沉重，且特異性防治手段有限，但研究者在該領(lǐng)域已取得顯著進展。
表1.目前已上市RSV治療藥物
2）RSV疫苗研發(fā)三大方向
在過去十年中，評估不同RSV疫苗策略的試驗數(shù)量顯著增加。RSV擁有多種表面蛋白，其中融合(F)蛋白和吸附(G)蛋白是兩種主要的糖蛋白，也是免疫接種的關(guān)鍵靶點。兩者對感染性和病毒致病性都至關(guān)重要。RSV有兩個不同的亞型，RSV-A和RSV-B，主要通過G蛋白的變異來區(qū)分，而F蛋白更為保守，這使得F蛋白成為開發(fā)疫苗和單克隆抗體的優(yōu)選靶點。自從發(fā)現(xiàn)F蛋白有兩種構(gòu)象形式，即"融合前F"（pre-F）和"融合后F"（post-F），并了解到融合前構(gòu)象可誘導更高效力的中和抗體后，pre-F已成為RSV特異性干預措施的首選靶點。
圖2.多種單克隆抗體靶向的融合前F蛋白抗原位點
當前的RSV候選疫苗研發(fā)布局主要集中在以下三大方向：
基于重組載體的疫苗：使用經(jīng)過修飾的復制缺陷型病毒，通過遞送相關(guān)RSV蛋白（抗原）的基因來誘導體液和細胞免疫反應。目前有三種基于重組載體的候選疫苗處于臨床試驗階段（2-3期）。
核酸疫苗：作用機制是基于將編碼RSV抗原的信使RNA（mRNA）引入細胞。近年來，mRNA疫苗在對抗SARS-CoV-2感染方面顯示出安全性和高效力，突出了這種方法的潛力。雖然該類型疫苗仍在開發(fā)中，只有一項用于成人的RSV mRNA疫苗的1期試驗已經(jīng)發(fā)表，但其從SARS-CoV-2疫苗中獲得的經(jīng)驗，后續(xù)可能會進行更多試驗。
基于蛋白的疫苗（包括全病毒滅活疫苗、顆粒疫苗和亞單位疫苗）：免疫機制是基于以更高密度的展示各種抗原以產(chǎn)生增強的免疫反應。目前的候選疫苗是為老年人或通過母體疫苗接種保護嬰兒而設計的。
目前RSV防治面臨雙重挑戰(zhàn)：治療端因病毒損傷窗口期短，藥物難以生效；預防端受歷史疫苗失敗案例制約，需精準靶向F蛋白前融合構(gòu)象。未來核心突破在于策略轉(zhuǎn)型——從抗病毒轉(zhuǎn)向早期暴露預防及免疫調(diào)節(jié)，并依托長效單抗（如Nirsevimab）、母體疫苗等創(chuàng)新技術(shù)實現(xiàn)全年齡段防護。
迪福潤絲生物RSV中和抗體檢測服務
迪福潤絲生物自有的CRO服務平臺「DIFF+」可針對RSV疫苗效果進行評價，提供基于熒光斑點計數(shù)法的RSV中和抗體檢測服務，該檢測方法能夠與傳統(tǒng)的PRNT檢測方法建立線性相關(guān)性，靈敏度高、檢測迅速，并且該實驗方法的特異性、重復性均能滿足中和實驗的要求，適用于高通量樣本的檢測。
圖3.RSV中和抗體檢測流程圖
熒光斑點計數(shù)法
測定RSV（呼吸道合胞病毒）中和抗體的方法有多種，其中熒光斑點計數(shù)法（Focus-Forming Assay, FFA）相對于傳統(tǒng)的細胞病變效應（Cytopathic Effect, CPE）法和其他方法具有以下明顯優(yōu)勢：靈敏度和特異性高、快速結(jié)果、定量準確、自動化和高通量、適用性廣泛。
表2.熒光斑點計數(shù)法具有明顯優(yōu)勢
熒光斑點計數(shù)法在RSV中和抗體檢測中展現(xiàn)出高靈敏度和特異性，可實現(xiàn)快速定量分析，并易于自動化和高通量篩查。相較于傳統(tǒng)CPE等方法，其在快速性、準確性和效率方面有著顯著優(yōu)勢，使其成為科研與實踐中優(yōu)先選用的可靠檢測方案。
毒株資源列表：
服務內(nèi)容：
RSV中和抗體檢測服務案例
基于以上檢測流程，迪福潤絲生物可進行RSV疫苗中和抗體檢測及抗病毒藥物篩選等服務。將待測樣本與RSV病毒共孵育后加入待感染細胞，CC孔為細胞對照，不加病毒，VC孔為病毒對照，只加病毒，檢測結(jié)果如圖所示。
根據(jù)熒光斑點計數(shù)儀的斑點計數(shù)結(jié)果，半中和滴度NT50使用GraphPad Prism軟件中的非線性回歸分析計算值，檢測樣本1的NT50值為0.02133μg/ml，檢測樣本2的NT50值為0.0199μg/ml。
面對RSV防治挑戰(zhàn)，迪福潤絲「DIFF+」平臺為您提供高效可靠的RSV中和抗體檢測解決方案。平臺采用熒光斑點計數(shù)法，兼具高靈敏度與高特異性，能夠實現(xiàn)快速、精準的定量分析。
選擇迪福潤絲，讓每一次檢測更精準，讓每一步研發(fā)更高效！
參考文獻：
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