鈣離子指示劑與離子載體使用指南
阿拉丁幫助您尋找成像Ca2+和細胞功能的最佳指標和電離層。
鈣(Ca2+)是一種重要的無處不在的第二信使,參與調節多種細胞過程,包括細胞增殖、基因轉錄、肌肉收縮和內吞作用。
使用本指南,我們可以為您的實驗找到最佳的Ca2+指示器,螯合劑和離子團。
Ca2+指標一目了然
指示劑 | 激發波長(nm) | 發射波長(nm) | Kd (nM) |
340/380 | 505 | 145 | |
Indo-1 | 346 | 475/405 | 230 |
488 | 520 | 345 | |
490 | 520 | 390 | |
494 | 516 | 2300 | |
552 | 581 | 570 |
BAPTA
BAPTA是一種非熒光Ca2+螯合劑,從EGTA中提取,對Ca2+的選擇性為Mg2+的105倍。它通常用于緩沖,在沒有Mg2+的情況下,Kd為160 nM。也可提供AM形式。
Fura-2
Fura-2是第一種商業化的熒光鈣指示劑。激發比為340 nm/380 nm,發射波長為505 nm。在科學文獻中有成千上萬的Fura-2參考文獻,它是迄今為止最重要的Ca2+指示染料之一。
Indo-1
Indo-1與Fura-2在1986年同時推出。它也是比例的,但模式不同。當在346 nm激發時,它在475 nm/405 nm處表現出發射比,而不是激發比。與Fura-2不同,它有光漂白的傾向。它也被用于各種各樣的應用,以大量的文獻出版物為例。
Fluo-8
自1989年引入以來,熒光成像揭示了Ca2+信號通路中許多基本過程的空間動力學。在細胞實驗中發現,Fluo-8(或Fluo-2介質親和力)比Fluo-4更亮(1.5倍)。它改善了細胞負載和Ca2+響應,同時保持方便的Fluo-3和Fluo-4光譜波長,在490 nm處最大激發,在520 nm處最大發射。Fluo-8加載可在室溫下進行。
Rhod-2
Rhod-2于1989年首次問世,其熒光激發極值在552 nm,發射極值在581 nm。在Ca2+結合之前,Rhod-2本質上是不熒光的,隨著Ca2+濃度的增加,Rhod-2變得更加熒光。Rhod-2較長的激發和發射使該指示物在具有高水平自身熒光的細胞和組織的實驗中非常有用,并可與其他波長較短的熒光染料進行多路復用。這些基于羅丹明的指示物的AM酯形式是陽離子的,這可以導致電位驅動的攝取進入線粒體。
Fluo-4 AM
Fluo-4是Fluo-3的類似物,兩個氯取代基被氟取代,這導致熒光激發增強在488 nm,因此更高的熒光信號水平。
Fluo-5 AM
Fluo-5 AM是Fluo-4的類似物,但其鈣結合親和力降低,因此適合檢測細胞內鈣水平,這將飽和Fluo-4 AM指示劑。
鈣離子載體
A23187(鈣霉素)具有可被紫外光激發的固有熒光,使其對可被紫外光激發的Ca2+指示劑(如Fura-2)不太有用,但對長波長Ca2+指示劑(如Fluo-2)仍然有用。
4-溴A-23187是非熒光的,因此與所有Ca2+指示劑兼容。它通常用于熒光Ca2+指標的原位校準,以平衡細胞內和細胞外Ca2+濃度,并允許Mn2+進入細胞,淬滅細胞內的染料熒光。
離子霉素是一種有效的Ca2+離子胞體,通常用于校準熒光Ca2+指標和修改細胞內Ca2+濃度,并用于研究Ca2+在細胞過程中的調節特性。
參考文獻
1.Erdahl WL, Chapman CJ, Taylor RW, Pfeiffer DR. Ca2+ transport properties of ionophores A23187, ionomycin, and 4-BrA23187 in a well defined model system. Biophys J. 1994 May;66(5):1678-93.
2. Drummond IA, Lee AS, Resendez E Jr, Steinhardt RA. Depletion of intracellular calcium stores by calcium ionophore A23187 induces the genes for glucose-regulated proteins in hamster fibroblasts. J Biol Chem. 1987 Sep 15;262(26):12801-5.
