PUREfrex®1.0于2011年推出，是基于PURE system開發的無細胞蛋白合成試劑盒，由轉錄、翻譯、能量再生所需的蛋白和核糖體組成。
圖2.PUREfrex®使用流程
PUREfrex®1.0使用方法（僅供參考）：
以20ul反應體系為例，如果需要擴大體積可以等比例增加對應試劑。
1. 在室溫或37℃下保溫1分鐘使溶液I完全融解，然后在冰上冷卻。
2. 在冰上融化溶液II和溶液III。
3. 將溶液I，溶液II和溶液III 渦旋后簡短離心收集管底內容物。
4. 根據下列表格配置反應液，每1kb加入模板DNA 1-3ng/ul。
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Water |
8-X μL |
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Solution I |
10μL |
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Solution II |
1μL |
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Solution III |
1μL |
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Template DNA |
X μL |
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總體積 |
20ul |
5. 在37°C的heat block或水浴中反應 2~4 h，合成蛋白。
6. 分析合成蛋白。通過SDS-PAGE驗證時，請用水稀釋反應液后進行電泳。
試劑盒組分：
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組分名稱 |
組分內容 |
保存溫度 |
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Solution I |
Amino acids, NTPs, tRNAs and substrates for enzymes etc. |
-20℃ |
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Solution II |
Proteins in 30 % glycerol buffer |
-20℃/-80℃ |
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Solution III |
Ribosome (20 μM) |
-80℃ |
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DHFR DNA |
PCR product containing a gene encoding dihydrofolate reductase (DHFR) from E.coli as a positive control. (20 ng/μL) |
-20℃ |
請注意：1.在打開試劑盒之前請將試劑盒儲存在-80°C的溫度下。2.溶液II和溶液III避免反復凍融。
產品信息：
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貨號 |
名稱 |
規格 |
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GFK-PF001-0.25-EX |
PUREfrex®1.0 |
1 x 250 µl |
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GFK-PF001-2ML-EX |
2 ml |
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GFK-PF001-10ML-EX |
5 x 2 ml |
除了以上目錄產品外，Cosmo Bio也能根據客戶的需求提供定制的PUREfrex®1.0。PUREfrex®1.0的成分信息是公開的，您可以根據PUREfrex®1.0設計定制試劑盒。
PUREfrex®1.0組分
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PUREfrex®1.0 Solution I (Buffer, Salts, Substrates)組分 |
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Hepes-KOH pH 7.6 |
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Potassium glutamate |
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Magnesium acetate |
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Spermidine |
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Dithiothreitol |
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10-Formyl-tetrahydrofolate |
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4 NTPs |
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20 Amino acids |
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Creatine phoshate |
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tRNA mixture |
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PUREfrex®1.0 Solution II (Proteins)組分 |
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20 Aminoacyl-tRNA synthetases (ARS) |
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Methionyl-tRNA transformylase (MTF) |
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3 Initiation factors (IF1, IF2, IF3) |
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3 Elongation factors (EF-Tu, EF-Ts, EF-G) |
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3 Release factors (RF1, RF2, RF3) |
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Ribosome recycling factor (RRF) |
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T7 RNA polymerase |
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Nucleoside diphosphate kinase (NDK) |
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Adenylate kinase (ADK, myokinase) |
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Ceatine kinase (CK) |
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Pyrophosphatase (PPiase) |
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PUREfrex®1.0 Solution III組分 |
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Ribosome |
定制應用舉例
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（-）RF1 |
用于通過如下圖所示的琥珀抑制合成含有非天然氨基酸的蛋白質。 |
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（-）T7 RNA polymerase |
可用于檢測其他RNA聚合酶性能，如大腸桿菌RNA聚合酶。 |
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（-）特異性氨基酸和（或）20種氨酰tRNA合成酶 |
用于合成含非天然氨基酸或少于20個氨基酸的蛋白質。 |
圖3.琥珀抑制途徑合成含有非天然氨基酸的蛋白質示意圖
當您的蛋白質需要分子伴侶的幫助或形成二硫鍵以形成正確的構象時，只需向PUREfrex®1.0中添加補充試劑即可。
分子伴侶-幫助蛋白正確折疊，合成可溶形式蛋白質
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產品貨號 |
產品名稱 |
規格 |
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GFK-PF003-0.5-EX |
DnaK Mix |
500 µl Equivalents |
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GFK-PF003-10ML-EX |
DnaK Mix |
5 x 2 ml Equivalents |
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GFK-PF004-0.5-EX |
GroE Mix |
500 µl Equivalents |
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GFK-PF004-10ML-EX |
GroE Mix |
5 x 2 ml Equivalents |
幫助形成二硫鍵的添加物
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產品貨號 |
產品名稱 |
規格 |
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GFK-PF005-0.5-EX |
DsbC Set |
500 µl Equivalents |
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GFK-PF005-10ML-EX |
DsbC Set |
5 x 2 ml Equivalents |
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GFK-PF006-0.5-EX |
PDI Set |
500 µl Equivalents |
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GFK-PF006-10ML-EX |
PDI Set |
5 x 2 ml Equivalents |
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