貓傳腹的疫苗與藥物研發之路
貓傳染性腹膜炎（FIP），簡稱貓傳腹，是由貓冠狀病毒（FCoV）感染引起的傳染性疾病。FCoV感染在世界各地呈地方性流行，也是導致寵物貓死亡的主要原因之一?？刂艶CoV感染最有效的方式是疫苗接種。然而目前僅有一款活疫苗在部分國家獲批上市，即輝瑞的Felocell FIP（Primucell），新的mRNA疫苗（也稱FCoV mRNA疫苗）當前處于探索階段。藥物方面，目前國內尚無獲批上市的貓傳腹專用藥，但有部分小分子藥物被證明有不錯的治療效果。
2017年，長期研究貓傳腹的加州大學戴維斯分校教授皮特森（Niels Pedersen）發表了一篇文章，稱一種3CL蛋白酶抑制劑（GC376）對貓傳腹有治療效果，但這種化合物的治療效果并不穩定。2018年，皮特森發表文章稱，441對貓傳腹有較好的治療效果。寵物圈內的名藥441（GS-441524）是一種小分子核苷類似物，是此前在美國獲批治療新冠的瑞德西韋的前體藥，相關專利掌握在美國制藥企業吉利德手中，而吉利德并未就此專利對外授權獸藥企業，后來只公開了441的分子式。
CRO服務（中和抗體檢測+細胞水平篩選）
迪福潤絲生物「DIFF+」CRO服務平臺可針對FCoV疫苗及藥物進行有效性評價，針對FCoV的疫苗與藥物早期研發，迪福潤絲生物可提供中和抗體檢測服務與獨家開發的蛋白酶抑制劑篩選系統，幫助研發企業加速進程，為早日實現合規獸藥、疫苗上市爭取更多時間。
FCoV（圖1）是一種有囊膜、不分節段的單股正鏈RNA病毒，屬尼多病毒目、冠狀病毒科、冠狀病毒屬，其基因組大小約為29kb。突刺蛋白（S蛋白）包含用于受體結合的亞基（S1）和介導膜融合亞基（S2），是產生中和抗體的主要蛋白，也在病毒和受體結合及入侵宿主過程中發揮重要作用。因此，編碼S蛋白及其片段的mRNA疫苗是有效預防貓傳染性腹膜炎的舉措。
圖1. FCoV病毒結構示意圖
FCoV中和抗體檢測服務
迪福潤絲生物提供基于CPE法的中和抗體檢測服務（圖2），該檢測方法靈敏度高、檢測迅速，并且該實驗方法的特異性、重復性均能滿足中和實驗的要求，適用于高通量樣本的檢測。
圖2. FCoV中和抗體檢測流程圖
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毒株類型 |
毒株名稱 |
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FCoV毒株 |
FCoV-II |
WSU79-1146 |
圖3.FCoV感染CRFK細胞0-48小時CPE效應變化圖
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FCoV血清中和抗體檢測服務 |
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樣本類型 |
血清、血漿或抗體樣本 |
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檢測方法 |
CPE法 |
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質控標準 |
提供自研的陽性對照（單抗） |
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結果交付 |
檢測報告 |
FCoV細胞水平篩選（蛋白酶抑制劑篩選服務）
FCoV病毒的多聚蛋白的裂解由兩種蛋白酶調控：主要蛋白酶（3CLpro，也稱為Mpro或nsp5）和木瓜蛋白酶樣蛋白酶（PLpro）。3CLpro在病毒生命周期中發揮的重要作用，使其成為藥物設計的一個有吸引力的重要靶點。迪福潤絲生物獨家開發的基于綠色熒光蛋白（GFP）的系統可進行大量的候選化合物高通量篩選。
本系統是一種正向的細胞水平篩選，全真模擬病毒進入細胞后的真實反應，當候選化合物對蛋白酶的抑制作用越強，熒光效果越明顯。本圖（圖4）展示了迪福潤絲生物蛋白酶抑制劑篩選系統通過肉眼直接觀察熒光變化的能力。在溶劑對照樣本（Indicator）中，無法看到綠色熒光（僅為背景值）。當陽性藥物GC376的濃度為3.125μM時，肉眼可觀察到微弱的綠色熒光，表示GC376在3.125μM的濃度下，已存在針對FCoV病毒的蛋白酶抑制活性。隨著GC376濃度增加，熒光強度顯著增強，這種肉眼可見的熒光變化直觀地體現了藥物的劑量依賴性，表示GC376對FCoV蛋白酶的抑制作用存在劑量依賴性。
圖4. 使用迪福蛋白酶抑制劑篩選系統進行FCoV陽性藥物GC376篩選的熒光變化圖