「DIFF+」HPV假病毒中和檢測服務(wù)｜助力疫苗研發(fā)精準高效-自主發(fā)布-資訊-生物在線

「DIFF+」HPV假病毒中和檢測服務(wù)｜助力疫苗研發(fā)精準高效

9月11日，國新辦舉行“高質(zhì)量完成‘十四五’規(guī)劃”系列主題新聞發(fā)布會。會上，國家衛(wèi)生健康委副主任、國家疾控局局長沈洪兵宣布：今年國家將推出面向適齡女生的HPV（人乳頭瘤病毒）疫苗接種服務(wù)，并將HPV疫苗納入國家免疫規(guī)劃。

圖片來源：央視新聞

HPV病毒結(jié)構(gòu)與基因組序列

人乳頭瘤病毒（Human Papillomavirus, HPV）屬乳頭瘤病毒科，為無包膜的雙鏈環(huán)狀DNA病毒，直徑約55nm。其衣殼由主要衣殼蛋白L1（72個五聚體構(gòu)成二十面體對稱結(jié)構(gòu)）和次要衣殼蛋白L2組成。病毒基因組長約8kb，包含早期區(qū)（E1-E7）、晚期區(qū)（L1-L2）及長調(diào)控區(qū)（Long Control Region, LCR）。其中E6/E7基因為關(guān)鍵致癌基因，通過干擾p53和視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白（Rb）通路驅(qū)動細胞惡性轉(zhuǎn)化。

圖1.HPV基因組E區(qū)（早期區(qū)）—橙色，L區(qū)（晚期區(qū)）—綠色基因，LCR（長調(diào)控區(qū)）—藍色，P97、P670、PE8—啟動子，pAE—早期多聚腺苷酸化位點，pALs—晚期多聚腺苷酸化位點

HPV致癌機制

近年來，研究表明HPV與宮頸癌發(fā)病密切相關(guān)，目前已分離出200多種HPV病毒，并且根據(jù)其致病力及致癌作用將其分為高危型HPV和低危型HPV，其中部分HPV可以通過性接觸傳播。HPV病毒具有嗜上皮特性，其感染宿主后可在表皮、生殖器、口腔黏膜等部位的上皮基底細胞中大量復制，當機體免疫力降低后可隨機整合到宿主基因組中，隨后沉默E2基因，從而減少其對E6、E7基因的抑制，使E6、E7蛋白過表達，輔以E5蛋白的表達，從而誘導感染細胞無限增殖甚至癌變。

研究表明高危型HPV的持續(xù)感染與高級別子宮頸病變及宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。90%的宮頸癌與高危型HPV持續(xù)感染密切相關(guān)，其中HPV16、18型的相關(guān)度最高。宮頸癌在全球女性惡性腫瘤發(fā)病率中排名第4，在15~44歲女性惡性腫瘤發(fā)病率中高達第二，是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，每年全球約有53萬例的初診宮頸癌病例，其中約有13萬例是中國女性。

圖2.HPV感染宮頸癌過程

圖片來源：知乎@NUT

HPV疫苗研發(fā)進展情況

目前國內(nèi)已有多款HPV疫苗上市，進口疫苗包括GSK的二價疫苗、默沙東的四價和九價疫苗，國產(chǎn)疫苗包括廈門萬泰的二價和九價疫苗、沃森生物的二價疫苗。國內(nèi)多家企業(yè)也正在積極推進HPV疫苗的研發(fā)，尤其是九價、十一價、十四價等高價疫苗的臨床試驗。部分疫苗已進入III期臨床試驗階段，預計未來幾年內(nèi)將有更多產(chǎn)品上市。

表1.國產(chǎn)HPV疫苗普遍預計將于2025年后陸續(xù)上市

數(shù)據(jù)來源：西南證券

迪福潤絲生物HPV假病毒中和抗體檢測服務(wù)

針對HPV中和抗體檢測，迪福潤絲生物采用世界衛(wèi)生組織（WHO）在《HPV VLP疫苗質(zhì)量、安全性及效力評價指導原則》中推薦的金標準方法——PBNA法（假病毒中和試驗）。中和抗體是可以特異性識別病毒表面的抗原中和位點，阻止病毒入侵細胞繁殖，保護機體免受其害，具有真正的抗病毒作用，是評價免疫效果的指標。

由DIFF-HPV假病毒中和抗體檢測結(jié)果（圖3）可計算得到，該HPV抗血清樣品針對HPV33型別的ID50為1800，針對HPV18型別的ID50為4266。當稀釋度為1/160時，兩種型別DIFF-HPV假病毒可以被抗血清完全中和。

產(chǎn)品目錄

迪福潤絲生物獨家開發(fā)的DIFF-HPV假病毒涵蓋GFP/RFP/BFP/Luciferase等多種報告基因，具有信噪比高、穩(wěn)定性強（反復凍融5次對假病毒無影響）、只需培養(yǎng)于普通的293T細胞中等優(yōu)勢，包含九價的HPV16型、18型、6型、11型、31型、33型、45型、52型等主要型別。假病毒本身具有單輪感染的特性，對實驗室生物安全等級要求低，非常適合用于HPV中和試驗PBNA法（pseudovirus based neutralization assay，PBNA）。