原代細(xì)胞培養(yǎng)，看似一個(gè)簡(jiǎn)單的問(wèn)題，但實(shí)際真的經(jīng)歷過(guò)百轉(zhuǎn)遷回的實(shí)驗(yàn)摸索后才發(fā)現(xiàn)真的要總結(jié)一下原代培養(yǎng)的這些小竅門：
先看看啥是原代細(xì)胞吧
原代細(xì)胞是從活體組織（例如活檢材料）中直接獲取，并在體外培養(yǎng)的細(xì)胞。由于這些細(xì)胞經(jīng)歷極少的群體倍增，因此比連續(xù)（腫瘤或人工永生化的）細(xì)胞系更能代表其來(lái)源組織的主要功能成分，使原代細(xì)胞成為體內(nèi)狀態(tài)更具代表性的模型;
處理樣本容易踩的坑：
錯(cuò)誤的方式：樣本解凍后直接開(kāi)始提取細(xì)胞
答：很容易讓細(xì)胞污染，在凍存樣本之前無(wú)論經(jīng)過(guò)什么樣的處理，在接收樣本開(kāi)始處理時(shí)，我們都需要先用hanks液進(jìn)行清洗1-2次，再用純雙抗浸泡或者吹打30秒-1分鐘，以完全排除污染。
切記切記要不然就會(huì)功虧一簣。
提取細(xì)胞時(shí)容易踩的坑：
1. 消化液不對(duì)，常見(jiàn)的組織消化液有膠原酶1，膠原酶2，各大公司生產(chǎn)的各種特效的胰酶等等，不同的部位的組織使用對(duì)應(yīng)的消化液，讓原代提取事半功倍；比如上皮細(xì)胞的提取通常用胰酶即可 ，處理好組織后，將組織浸泡在胰酶中，置于4°，第二天輕松得到上皮細(xì)胞。
提出來(lái)的細(xì)胞魚龍混雜；
本來(lái)要提取的是內(nèi)皮細(xì)胞；
一頓神操作下來(lái)
放培養(yǎng)箱后第二天一瞅，
自己都呆了，
眼花繚亂都不足以形容自己提取的這盤細(xì)胞，
隨便數(shù)一下起碼4.5種
以下是一些原代的正常圖片,僅供參考,有其他形態(tài)對(duì)比需要后臺(tái)聯(lián)系我們哦：
上皮細(xì)胞 內(nèi)皮細(xì)胞 成纖維細(xì)胞 平滑肌細(xì)胞
原代細(xì)胞去雜質(zhì)需要掌握的方法：
1. 采用時(shí)差貼壁法：成纖維細(xì)胞1-2小時(shí)可以貼上，角化細(xì)胞4小時(shí)內(nèi)，膠質(zhì)細(xì)胞1小時(shí)左右全部貼壁，神經(jīng)細(xì)胞6小時(shí)開(kāi)始貼壁，一般8-10個(gè)小時(shí)貼壁完成，最長(zhǎng)的細(xì)胞貼壁時(shí)間也在48小時(shí)內(nèi)，要是超過(guò)48小時(shí)沒(méi)有貼壁，就狠心扔掉吧，那已經(jīng)不是你的寶了
2. 采用專用培養(yǎng)基去細(xì)胞雜質(zhì)：各種原代細(xì)胞都有其需要的生長(zhǎng)因子，激素和受體，因此，各大商家經(jīng)過(guò)對(duì)細(xì)胞長(zhǎng)期的研究，都會(huì)有各種各樣的針對(duì)原代細(xì)胞培養(yǎng)采用的培養(yǎng)體系
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啟達(dá)生物擁有32種原代細(xì)胞培養(yǎng)體系， 18種腫瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)體系，16種類器官培養(yǎng)體系，這些都是以低血清和無(wú)血清方式供貨的哦
低血清和無(wú)血清培養(yǎng)體系首先有助力抑制雜細(xì)胞生長(zhǎng)，提高目的細(xì)胞生長(zhǎng)的速度，其次，啟達(dá)生物的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中含有抵抗非目的細(xì)胞生長(zhǎng)的小分子化合物，抑制雜細(xì)胞生長(zhǎng)；再次，生長(zhǎng)因子含有目的細(xì)胞生長(zhǎng)所需蛋白，為目的細(xì)胞的生長(zhǎng)保駕護(hù)航
3.磁珠篩選法：磁珠分離是一種快速，高效，清潔的過(guò)程，科學(xué)家用其取代過(guò)濾，離心和分離技術(shù)。 磁珠和磁微粒通過(guò)功能化的抗原，抗體，催化劑，蛋白或核酸發(fā)揮作用，對(duì)細(xì)胞，細(xì)菌，病毒和其他生物體發(fā)揮作用。 然后利用磁性分離器將這些成分從復(fù)雜的基質(zhì)中分離出來(lái)。 結(jié)果就是從目標(biāo)整體中濃縮富集出樣本,磁珠篩選的步驟公眾號(hào)之前發(fā)過(guò)，有需要的同學(xué)往回看哦
4.高速離心沉淀法去雜質(zhì)，顧名思義使用重力離心，不同種類的細(xì)胞會(huì)聚集到一個(gè)層面，一般在提取血液細(xì)胞的時(shí)候用的最多
點(diǎn)個(gè)關(guān)注，細(xì)胞提取不迷路，下一節(jié)，我們將整理怎么避免原代細(xì)胞提取時(shí)污染！