本土新冠病例病毒變異監測情況

據中疾控全國新型冠狀病毒感染疫情情況（2024年12月）的報告，2024年12月1日-12月31日，全國31個?。ㄗ灾螀^、直轄市）及新疆生產建設兵團發熱門診（診室）診療量波動上升。從12月13日的8.1萬波動上升至12月30日的12.8萬（本月最高）。

2024年第49周（12月2日-12月8日）至第52周（12月23日-12月29日），全國哨點醫院流感樣病例占門（急）診就診人數比例逐漸升高，其中流感病毒陽性率為28.7%，新冠病毒陽性率為1.2%（圖1）。

圖1. 全國哨點醫院流感樣病例新冠和流感病毒陽性率變化趨勢 

2024年12月1日-12月31日，全國31個?。ㄗ灾螀^、直轄市）及新疆生產建設兵團共報送3836例本土病例新冠病毒基因組有效序列，均為奧密克戎變異株。主要流行株為XDV系列變異株和JN.1系列變異株。根據采樣日期，第49周（12月2日-12月8日）至第52周（12月23日-12月29日）JN.1及其亞分支占比分別為31.5%、30.3%、35.9%、37.6%，XDV及其亞分支占比分別為62.3%、64.3%、59.7%、59.1%（圖2）。 

圖2. 全國新冠病毒感染本土病例變異株變化趨勢

DIFF新冠體外藥效評價

迪福潤絲生物采用自主研發的蛋白酶抑制劑篩選系統來發現新的抗新冠化合物，不僅能進行初步的藥物篩選，還能定量分析候選藥物的劑量-反應關系，計算IC₅₀。以新冠病毒（3CL）的主要蛋白酶為例，下圖比較了使用活病毒檢測方法和DIFF的檢測試劑盒檢測同一種 COVID-19蛋白酶抑制劑的結果。作為抗病毒藥物的候選者，GC376通過抑制病毒復制所需的關鍵蛋白酶發揮作用。案例表明，兩種檢測方法得出的IC₅₀值非常接近（圖3），這證實了我們所設計的系統在模擬真實病毒感染環境以評估藥物療效方面的可靠性。

圖3. 蛋白酶抑制劑篩選系統IC50測定結果與真病毒檢測結果對比

圖4. 蛋白酶抑制劑篩選系統的熒光強度與有效藥物濃度呈正相關

迪福潤絲專利蛋白酶抑制劑檢測系統是基于綠色熒光蛋白（GFP）衍生蛋白的熒光報告技術。此系統的核心特點在于，只有在抑制劑有效作用于目標蛋白時，衍生蛋白才會發出熒光信號。隨著抑制劑作用的增強，熒光強度正向增加。上圖展示了通過肉眼直接觀察熒光變化的能力（圖4）。在對照樣本（DMSO處理組）中，無法看到綠色熒光（僅為背景值）。當GC376的濃度為1μM時，可見到微弱的綠色熒光，這表明有限的活性。然而，當GC376濃度增至10μM時，熒光強度顯著增強，說明藥物作用導致的熒光標記增多。這種肉眼可見的熒光變化直觀地顯示了藥物效應的劑量依賴性。

DIFF新冠體內藥效評價

1）攻毒保護實驗

迪福潤絲生物采用自主構建的VSV載體新冠假病毒進行疾病動物模型研究（組圖5）。由于假病毒與天然病毒的相似性，DIFF新冠假病毒可用來進行模擬感染實驗，與新冠病毒SARS-CoV-2感染動物模型結果相似，結果可靠且重復性高（表1）。

表1  DIFF新冠假病毒與SARS-Cov-2病毒模擬攻毒實驗對比

新冠(SARS-CoV-2)真病毒感染模型（小鼠體重變化）

DIFF 新冠假病毒感染模型（小鼠體重變化）

新冠(SARS-CoV-2)真病毒感染模型（小鼠生存率）

DIFF 新冠假病毒感染模型（小鼠生存率）

組圖5. DIFF新冠假病毒的有效性對比

*疫苗1、疫苗2為分別免疫兩種候選疫苗的小鼠實驗組，空白對照為免疫PBS的小鼠對照組。

通過上面的組圖可知，DIFF新冠假病毒感染后，空白小鼠3天后體重驟降，5～7天均死亡。SARS-CoV-2真病毒感染后，空白小鼠3天后體重驟降，5天均死亡。兩種病毒感染小鼠后，免疫組/治療組小鼠均存活且體重變化平穩。結果表明，DIFF新冠假病毒與SARS-CoV-2感染小鼠后具有一致的表現，這表明該DIFF新冠假病毒感染模型是BSL-2條件下SARS-CoV-2感染的可替代模型。

2）血清中和抗體檢測

中和抗體檢測對于臨床前以及臨床試驗和大規模接種后疫苗效果的評估至關重要。然而，利用天然病毒進行中和抗體檢測成本高，對實驗室的生物安全等級要求高。DIFF新冠假病毒在抗原性質和免疫原性分析中具有很強的效力，可用來檢測各種血清中和抗體。

當使用DIFF新冠假病毒感染細胞時，DIFF新冠假病毒會借助病毒囊膜表面的S蛋白與細胞膜上的ACE2蛋白相作用，進一步感染宿主細胞并復制，報告基因eGFP或Luciferase隨即表達，其表達量與被感染的假病毒數量成正比，如果假病毒在細胞感染前與含有中和抗體的樣品共同孵育，將阻止病毒進入細胞過程。故可以通過顯微鏡下綠色熒光蛋白強度或化學發光強度的結果來反映樣品中和抗體的水平，綠色熒光蛋白強度或化學發光強度與中和抗體濃度成反比。

DIFF新冠假病毒中的報告基因eGFP為增強型綠色熒光蛋白，檢測靈敏度高，熒光強度強、熒光性質穩定，便于后續觀察與檢測（圖6）。另一種報告基因Luciferase是一種熒光素酶，可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達，定量結果讀取更直觀，適用于的高通量篩選。

圖6.DIFF新冠假病毒（eGFP報告基因）血清中和抗體檢測案例

關于DIFF假病毒

迪福潤絲生物構建的新冠假病毒，基于水皰性口角炎病毒（VSV）載體，融合了新冠病毒的S蛋白，成為研究SARS-CoV-2的有力工具。這種RNA囊膜病毒通過替換VSV的G蛋白并插入報告基因（如eGFP或Luciferase），模擬天然新冠病毒的結構和入侵細胞的機制。數據顯示，VSV新冠假病毒能夠有效感染hACE2表達的小鼠模型，同時保持高安全性，適合在BSL-2級別的實驗室操作。它的表面蛋白結構類似于天然病毒，使其成為疫苗和藥物研發中SARS-CoV-2的理想替代（圖3）。

圖3. 迪福潤絲生物基于VSV載體的新冠假病毒在體外和體內應用示意圖

VSV新冠假病毒——產品目錄

基于對新冠疫苗的深入研究與開發，迪福潤絲生物構建了含有eGPF和Luciferase熒光報告基因的多種新冠假病毒以豐富自有的生物資源庫(Bio Database)。包括新冠原始株及后續在流行中的變異毒株。新冠假病毒資源見下表：

*含現有及在研新冠假病毒產品