近日，我司聯合浙江省疾病預防控制中心微生物所，在國際知名期刊《ACS Pharmacology & Translational Science》上發表重要研究成果。研究團隊成功開發出基于重組綠色熒光蛋白的病毒蛋白酶抑制劑篩選平臺DIFF-rGFP，這一創新體系大幅提升了抗病毒藥物篩選的速度與準確性，標志著相關技術邁入新紀元。
文章重點闡述了DIFF-rGFP的構建原理與應用優勢。相較于傳統篩選方法，DIFF-rGFP在安全性、靈敏度、廣譜性及細胞相關性方面實現了提升，為病毒蛋白酶抑制劑的發現提供了一種更安全、更高效、適用于多病毒家族的創新篩選平臺。
技術突破亮點
傳統病毒蛋白酶抑制劑篩選方法長期面臨兩大難題：非細胞水平篩選缺乏體內相關性，而活病毒篩選則存在生物安全風險高、通量低等局限。迪福潤絲研發團隊通過對綠色熒光蛋白（GFP）結構的深入探索，成功鑒定了三個高度柔性區域?（E116~L120、M154~N160、H170~V177），這些區域能夠容納外源蛋白酶切割序列而不影響熒光表達，為廣譜抑制劑篩選奠定了堅實基礎。
圖1. 柔性區域測試。（A）將多種切割序列插入三個區域中的代表性位點。（B）可用位點和柔性區域在GFP三維結構中的相應位置。??
DIFF-rGFP系統采用P2A自切割序列智能連接重組GFP與蛋白酶基因，確保兩者在細胞內的協同表達，顯著提升檢測靈敏度。以SARS-CoV-2 3CL蛋白酶為模型的驗證實驗中，使用已知抑制劑GC376和Ensitrelvir進行測試，結果顯示該系統與傳統活病毒檢測法靈敏度僅相差一個數量級，展現出優異的可靠性。
圖2. 活病毒檢測與rGFP15-3CLpro檢測的半數有效濃度對比
應用前景廣闊
目前，DIFF-rGFP技術平臺已成功應用于多種病毒蛋白酶抑制劑的篩選工作，可在細胞水平直接模擬病毒自然感染過程，有效杜絕漏篩和假陽性問題。這一創新技術不僅為病毒蛋白酶抑制劑篩選提供了強大工具，更為整個抗病毒藥物研發行業建立了新的技術標準。
攜手共創未來
作為專注于生物醫藥技術服務的創新企業，迪福潤絲生物將持續優化DIFF-rGFP平臺，拓展其在更多病毒靶點中的應用。我們誠邀全球藥企和科研機構攜手合作，共同推動抗病毒藥物研發進程，為全球公共衛生安全貢獻力量！
文章信息：該研究成果已于2025年10月9日正式發表于《ACS Pharmacology & Translational Science》，歡迎引用原文：https://doi.org/10.1021/acsptsci.5c00262
參考文獻：