近日，我司聯(lián)合浙江省疾病預防控制中心微生物所，在國際知名期刊《ACS Pharmacology & Translational Science》上發(fā)表重要研究成果。研究團隊成功開發(fā)出基于重組綠色熒光蛋白的病毒蛋白酶抑制劑篩選平臺DIFF-rGFP，這一創(chuàng)新體系大幅提升了抗病毒藥物篩選的速度與準確性，標志著相關(guān)技術(shù)邁入新紀元。
文章重點闡述了DIFF-rGFP的構(gòu)建原理與應用優(yōu)勢。相較于傳統(tǒng)篩選方法，DIFF-rGFP在安全性、靈敏度、廣譜性及細胞相關(guān)性方面實現(xiàn)了提升，為病毒蛋白酶抑制劑的發(fā)現(xiàn)提供了一種更安全、更高效、適用于多病毒家族的創(chuàng)新篩選平臺。
技術(shù)突破亮點
傳統(tǒng)病毒蛋白酶抑制劑篩選方法長期面臨兩大難題：非細胞水平篩選缺乏體內(nèi)相關(guān)性，而活病毒篩選則存在生物安全風險高、通量低等局限。迪福潤絲研發(fā)團隊通過對綠色熒光蛋白（GFP）結(jié)構(gòu)的深入探索，成功鑒定了三個高度柔性區(qū)域?（E116~L120、M154~N160、H170~V177），這些區(qū)域能夠容納外源蛋白酶切割序列而不影響熒光表達，為廣譜抑制劑篩選奠定了堅實基礎。
圖1. 柔性區(qū)域測試。（A）將多種切割序列插入三個區(qū)域中的代表性位點。（B）可用位點和柔性區(qū)域在GFP三維結(jié)構(gòu)中的相應位置。??
DIFF-rGFP系統(tǒng)采用P2A自切割序列智能連接重組GFP與蛋白酶基因，確保兩者在細胞內(nèi)的協(xié)同表達，顯著提升檢測靈敏度。以SARS-CoV-2 3CL蛋白酶為模型的驗證實驗中，使用已知抑制劑GC376和Ensitrelvir進行測試，結(jié)果顯示該系統(tǒng)與傳統(tǒng)活病毒檢測法靈敏度僅相差一個數(shù)量級，展現(xiàn)出優(yōu)異的可靠性。
圖2. 活病毒檢測與rGFP15-3CLpro檢測的半數(shù)有效濃度對比
應用前景廣闊
目前，DIFF-rGFP技術(shù)平臺已成功應用于多種病毒蛋白酶抑制劑的篩選工作，可在細胞水平直接模擬病毒自然感染過程，有效杜絕漏篩和假陽性問題。這一創(chuàng)新技術(shù)不僅為病毒蛋白酶抑制劑篩選提供了強大工具，更為整個抗病毒藥物研發(fā)行業(yè)建立了新的技術(shù)標準。
攜手共創(chuàng)未來
作為專注于生物醫(yī)藥技術(shù)服務的創(chuàng)新企業(yè)，迪福潤絲生物將持續(xù)優(yōu)化DIFF-rGFP平臺，拓展其在更多病毒靶點中的應用。我們誠邀全球藥企和科研機構(gòu)攜手合作，共同推動抗病毒藥物研發(fā)進程，為全球公共衛(wèi)生安全貢獻力量！
文章信息：該研究成果已于2025年10月9日正式發(fā)表于《ACS Pharmacology & Translational Science》，歡迎引用原文：https://doi.org/10.1021/acsptsci.5c00262
參考文獻：