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腺相關病毒血清型眾多（12種），不同血清型對不同組織親和性不同，因此在具體科學研究中，以下問題往往困擾著廣大科研工作者：選擇何種血清型？如何注射？注射多少病毒？注射部位如何選擇？注射多久檢測？本文就常見的注射部位和方法做一個簡單的歸納，希望能夠為大家提供一個概念和思路。
腺相關病毒屬于微小病毒科(parvovirus)，為無包膜的單鏈線狀DNA病毒，基因組大小約4.7kb。利用腺相關病毒可以將外源基因轉入動物組織和細胞中，具有安全性高、免疫原性低、宿主范圍廣、表達穩定等多種優點，廣泛應用于動物體內研究。
腺相關病毒血清型眾多（12種），不同血清型對不同組織親和性不同，因此在具體科學研究中，以下問題往往困擾著廣大科研工作者：選擇何種血清型？如何注射？注射多少病毒？注射部位如何選擇？注射多久檢測？本文就常見的注射部位（大腦、視網膜、肝臟、心臟和動脈、肺臟、腎臟、肌肉、腸）和方法做一個簡單的歸納，希望能夠為大家提供一個概念和思路。
一、大腦
大腦組織常用血清型有AAV1，AAV2，AAV5，AAV8和AAV9，其中神經組織常見的血清型有AAV2，AAV5和AAV8。對大腦組織而言，AAV5應用范圍更廣，AAV8更有效（值得注意的是，在猴子的神經組織中，AAV5更有效）。從作用效果上看，AAV8大于AAV1。
針對大腦組織不同部位，AAV不同血清型靶向性有所差異：
1） 海馬組織：AAV9比AAV8更有效；
2） 神經組織不同的細胞，不同血清型靶向性不同：如神經元常用的血清型有AAV1、AAV2、AAV5和AAV9；星形膠質細胞和少突膠質細胞常用的血清型有AAV1和AAV5。
總體而言，在所有組織中，AAV2適用性最廣并在腦部組織也有所體現，例如其可以達到大腦組織75%的區域。AAV2、AAV5、AAV8和AAV9也比較常見，應根據不同組織進一步慎重選擇，在此介紹幾種特例：
1、腸神經系統(Enteric Nervous System ENS)，是由神經細胞組成的復雜網絡，遍布整個腸胃消化管道。其神經元的數量和脊髓相當(約1億個神經細胞)。該神經系統在人體軀干下部，屬于迷走神經，以薄層的形式分布于消化肌之間，調節消化。常用AAV5、AAV6、AAV8 和 AAV9。AAV6對腸神經膠質和神經元有一定的靶向性。注射部位可以選擇降結腸，注射量和滴度： 滴度為1.3 × 1012GC/ml的病毒注射5 μl即可，檢測時間：注射后2周開始表達，2-6周均有檢測。
2、腦組織常見的血清型為AAV9，注射方法：左心室注射或者側腦室注射，注射劑量和滴度：選擇滴度為0.5–4.0 × 1011GC/ml的病毒液，稀釋成100μl，注射兩周之后（14d）開始檢測。下圖為一些腦部組織注射情況：
Fig1. Transduction and phenotyping of transduced cells in the cerebral cortex
Fig2. Transduction of cells in the hippocampal formation.
Neuroscience 138 (2006) 501–510
Fig3. Transduction efficiency of recombinant adeno-associated virus (AAV) in the myenteric plexus (MP) of the enteric nervous system:a comparison across serotypes 1, 2, 5, 6, 8, and 9
Fig4. Neuronal tropism of recombinant adeno-associated virus (AAV) transduction in the submucosal plexus (SMP): serotypes 1, 2, 5, 6,8, and 9.
Molecular Therapy vol. 23 no. 3 mar. 2015
二、視網膜
視網膜組織常用血清型有AAV1、AAV2和AAV5。視網膜組織由于其特殊性，因而有自身的特點：注射成功率20-30%，容易造成視網膜炎癥和損傷，注射完需要使用1%阿托品（和少量新霉素、多粘菌素B硫酸鹽和地塞米松眼膏施用于眼睛，延長瞳孔擴張時間，減少腺體分泌，減少炎癥反應），連續使用3-5d。其常用的注射量為0.5μl，病毒滴度1.5x107GC/ml。常用注射方法：視網膜下注射或者玻璃體注射。
但不同血清型又有不同特點：AAV1主要作用于視網膜上皮細胞，注射后2-4周可以檢測；AAV2主要作用于感光細胞、視網膜上皮細胞和玻璃體，AAV2玻璃體注射后分布廣泛，2-4周可以檢測； AAV5可作用于視網膜上皮細胞和感光細胞，在感光細胞中表達AA5>AAV2，2-4周檢測。下圖為一些視網膜組織的注射情況：
Fig 5. AAV added to the retinal ganglion cell surface in culture vs. intravitreal injection in vivo.
Vision Research 48 (2008) 377–385
三、肝臟
對肝臟而言，主要的腺相關病毒載體有：AAV2、AAV5、AAV7 和AAV8，其中AAV7 和AAV8的效率是AAV2的10-100倍。注射部位常選擇門靜脈、外周靜脈和尾靜脈。注射病毒滴度一般選擇8×1010-2×1012（GC/kg）（人、靈長類）；1×1011GC/只鼠，稀釋成50-100μl進行尾靜脈注射；注射后2周之后可以檢測。下圖為肝臟注射的一些情況：
Fig 6. In vivo vector specificity analysis
四、心臟和動脈
對心臟和動脈而言，常用載體有：AAV1、AAV6、AAV8 和AAV9。其中 AAV2、AAV5、AAV7也可以使用，但是表達比較慢，3個月后表達量才能與AAV1、AAV6表達量相當。所有血清型中AAV8和AAV9最有效，2個月左右其表達量達到最高。常見的注射部位為冠狀動脈、主動脈、心肌和尾靜脈。注射病毒滴度為1.9×1011-1012GC/ml，稀釋成100μl-250μl （大鼠劑量稍高于小鼠）注射；但是對于心臟原點注射而言，常采用1010GC/ml病毒滴度，稀釋成20μl使用。檢測時間：一般在2周之后可以檢測。下圖為注射的一些情況：
Biodistribution of LacZ expression and vector genomes 4 weeks after direct injection of 5 ×1011 vg of AAV8- and AAV9-CB-LacZ into the rat heart., heart; Li, liver; Lu, lung; Br, brain; Te, testis; Ki, kidney; Sp, spleen; St, stomach; Ga, gastrocnemius.
HUMAN GENE THERAPY 19:1359–1368
五、肺臟
肺臟常用的腺相關病毒載體有AAV1、AAV2、AAV5、AAV6和AAV9。由于肺臟表面唾液酸受體分布比較多，因此AAV5型比較常用；相比之下AAV2和AAV6轉導效率相當。常見的注射方式有滴鼻、霧化吸入或氣管內注射，注射病毒滴度為1012GC/ml，稀釋成3μl，注射完之后2周可以檢測表達情況。下圖為注射的一些情況：
Histochemical detection of AP expression in mouse lungs 1 month after vector exposure.
JOURNAL OF VIROLOGY, Feb. 2000, p. 1524–1532
六、腎臟
腎臟常用載體有AAV2、AAV8 和AAV9。注射病毒的滴度一般選擇1-5×1011GC/ml，稀釋成50-200μl注射。常見的注射部位有腎動脈、腎靜脈和左髂脈、腹主動脈，注射完2周之后可以檢測表達情況。下圖為注射的一些情況：
In vivo long-term transduction by AAV serotype 2 vector into the rat kidney.
Nephron ExpNephrol 2004;96 :e119–e126
七、肌肉
肌肉組織常用血清型有AAV2、AAV8 和AAV9。其中AAV8、AAV9最常用，心肌、胰腺和腎上腺也是如此。骨骼肌分為快速和慢速肌纖維，AAV2常作用于慢速肌纖維；AAV6則對二者都有效。對不同年齡階段的鼠，注射劑量有所不同：幼鼠選擇的病毒量為 7×1010-1.2×1011GC/g；成年鼠選擇的病毒量為3.5 ×1011 -7×1012GC/只；但是低劑量的AAV9不能到達所有心肌細胞。下圖為注射的一些情況：
Transduction of muscle fibersby different AAV serotypes.
J Gene Med 2005; 7: 442–451.
Representative photomicrographs of sections of skeletal muscle
MOLECULAR THERAPY Vol. 14, No. 1, July 2006
八、腸
腸組織常用血清型有AAV1、AAV2 和AAV5。常見的注射方式有口服、灌腸、腹腔注射、腸系膜動脈注射。一般選擇注射滴度1×1011GC/ml,稀釋成100μl（PBS或者稀釋液稀釋）使用，注射2周后可以檢測。
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