由于實驗的不確定性，嚴謹的 Western Blot（WB）實驗設計要求有良好的參照體系。這對實驗結果分析是非常有用的，也是實驗中不可缺少的步驟。
良好的參照體系通常包括分子量Marker、空載體對照、陽性對照及內參等。內參通常是在被檢樣本中高表達且表達水平相對穩定的蛋白。因此，我們常常選擇管家基因編碼的蛋白來作為內參。
WB 實驗中使用內參
好處多多
WB實驗中使用內參有多種好處：用于校正上樣誤差，檢測轉膜情況以及顯色或發光體系是否正常等。
校正蛋白上樣量。
在WB實驗中，比較不同樣本中某種蛋白的表達量時，如果上樣量有差異，無疑會嚴重影響實驗結論。檢測內參并確保各泳道間內參蛋白量一致即可排除上樣量的影響。
判斷轉膜效率。
除了上樣量，轉膜時不同泳道之間的轉移效率不同，也會給最終結果帶來極大影響。在比較不同泳道樣品中目標蛋白表達量時，可以根據內參蛋白的轉印效率來確定目的蛋白是否被有效轉印到膜上。
排除邊界效應。
如果一次WB檢測樣本較多而使用較大的凝膠，凝膠邊緣泳道在轉膜時效率可能與中間的泳道效率不同。內參的設置同樣可以排除邊界效應的影響。
檢測顯色或發光體系是否正常。
由于內參蛋白在樣本中通常是高表達，比較容易被檢測到，因此也可作為其中一種WB實驗的陽性對照。通過內參的信號，來判定顯色或發光體系是否正常工作。
由于這些顯而易見的好處，在文章發表時，通常要求設置內參來說明實驗結果的有效性。
選擇內參蛋白的時候
要注意幾個原則
在選擇內參蛋白時，我們需要遵循幾個原則：
種屬來源
樣本的種屬來源不同，內參的選擇也是不一樣的。哺乳動物的樣本需要選擇哺乳動物中穩定表達的蛋白作為內參；同樣的，植物樣本需要選擇植物中穩定表達的蛋白做內參；
細胞定位
靶標蛋白的細胞定位不同，適合的內參也不同。如全細胞裂解液可選擇beta-actin、beta-tubulin 等，膜蛋白一般選擇Na K ATPase，核蛋白則選擇 Lamin B1、Histone H3 等；
分子量
內參蛋白的分子量需要與目標蛋白有所區別，否則兩者條帶無法分開。一般目的蛋白與內參蛋白大小至少相差5kDa以上；
表達因素
內參的選擇還需要考慮實際的實驗環境。GAPDH是代謝類蛋白，在活組織中表達較穩定。β-Actin 和 β-Tubulin是結構蛋白，不同組織的細胞結構會有差異性。在組織缺氧、糖尿病等因素條件下會導致GAPDH的表達增高，此種情況下GAPDH就不適合做內參。
綜上，設計實驗方案的時候應該考慮實際的實驗因素并查詢相應文獻而選擇合適的內參，在實驗過程中也應該注意內參表達是否出現異常。
小編為大家整理了實驗中常用的內參蛋白列表，這份列表不止適用于 WB 實驗，在其他實驗中如果需要選取內參蛋白也可以參考：
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